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本试验设计4对引物Primer1,Primer2,Primer3和Primer4分别扩增第9、第10、第11外显子和第12内含子。采用PCR-SSCP方法首次研究了中国荷斯坦牛Nramp1基因exon9,exon10和exon11序列及其与奶牛乳腺炎的关联性。结果如下:在Primer1,Primer2和Primer3的扩增片段中共发现3个SNP多态位点,位于Nramp1基因序列的7012bp(第9内含子)、7401bp(第11外显子)和7455bp(第11外显子)处。Primer1的PCR扩增产物不具有SNP位点。Primer2的PCR扩增产物经PCR-SSCP检测到3种基因型MM,MN和NN,基因型频率分别为0.756,0.198和0.046,基因型分布服从Hardy-Weinberg平衡(P＜0.05)。等位基因M和N的基因频率分别为0.854和0.146,其中M为优势等位基因。基因型为多态信息含量为0.2183,显示该位点遗传多态性为低度多态(PIC＜0.25)。测序分析检测到7012bp的C/T突变,处于内含子9中(GenBank登录号:EU281620)。Primer3的PCR扩增片段经PCR-SSCP检测到3种基因型AA,AB和BB,基因型频率分别0.610,0.314和0.076,基因型分布服从Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。等位基因A和B的基因频率分别为0.767和0.233,其中A为优势等位基因。基因型为多态信息含量为0.2942,显示该位点遗传多态性为中度多态(0.25＜PIC＜0.05)。测序分析检测到2个SNPs,均处于外显子10中,分别为7401bp的G/C突变和7455bp的A/C突变,分别导致Pr0356Ala和Leu374Met替换。Primer4克隆测序得到了intron12的部分准确序列并提交到NCBI数据库(GenBank登录号:EF682067)。GLM分析了扩增片段不同基因型与与奶牛乳腺炎的关联性,结果显示牛场效应和产犊季节对体细胞评分的影响极显著(P＜0.01),胎次对体细胞评分的影响显著(P＜0.05),不同基因型对体细胞评分的影响不显著(P＞0.05)。