【摘 要】
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乙型肝炎病毒(HBV）是一种DNA病毒，是引起乙型病毒性肝炎的病原体。其基因组为闭合环状双链DNA，大小为3.2kb。HBV主要有3种抗原，分别是 HBsAg（表面抗原）、HBcAg（核心抗原）以及 HBeAg（e
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乙型肝炎病毒(HBV）是一种DNA病毒，是引起乙型病毒性肝炎的病原体。其基因组为闭合环状双链DNA，大小为3.2kb。HBV主要有3种抗原，分别是 HBsAg（表面抗原）、HBcAg（核心抗原）以及 HBeAg（e抗原），其中HBsAg和HBcAg的检测在临床上已广泛应用，但在特异性与灵敏度方面存在不足之处。核酸检测是通过实时荧光定量PCR技术，检测病毒DNA在血液中的含量进而推算乙肝病毒颗粒在血液中的含量，达到病毒含量检测的效果。该方法特异性与灵敏度较高，但存在操作相对繁琐且成本较高等问题。 核酸适配体是通过体外人工进化程序（SELEX技术）筛选得到的一段寡核苷酸，它可以高效、特异地结合各种不同的配体，如蛋白、小分子化合物、细胞等，特异性如同抗体一样。由于其具有靶分子范围广、分子质量小、免疫原性低、易于化学合成、易储存和易修饰等诸多优点，因此在医学诊断和治疗、药物分子设计以及分析检测中具有广泛的应用前景。 本实验以免疫磁珠为载体，捕获乙肝病人血清中的病毒，利用SELEX技术从随机单链DNA文库中筛选得到富集的亲和配基，通过实时荧光定量PCR检测富集效果，并筛选出与 HBV结合的核酸适配体，利用筛选出的 HBV适配体进行HBV蛋白检测。同时比对 HBV全基因组序列，找到相对保守区序列，利用primer premier5.0软件设计出相应引物和taqman探针进行HBV基因检测。 通过研究，本实验确定了免疫磁珠可以捕获乙肝病人血清中的病毒，并以此为基础通过13轮SELEX筛选，以及实时荧光定量PCR的鉴定，得到了与HBV特异性结合的1条适配体。适配体技术和基因检测技术可以在同一检测水平上对病毒颗粒中的表面蛋白和基因进行实时荧光定量 PCR检测。这样既可提高病毒表面蛋白的检测灵敏度，也可提高了 HBV基因检测的准确率。为今后 HBV的检测应用提供更为有效的技术方法。
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