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巨大芽孢杆菌L2是课题组从烤烟根际分离得到,对多种植物病原菌均具有较强的抑制效果。本文利用生物活性追踪对L2菌株的抑细菌活性成分进行了分离纯化,探究所得到单体化合物抑细菌活性及抑细菌机理。主要结果如下:1、活性筛选巨大芽孢杆菌L2不同极性溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇以及水制备的粗提物。结果表明:各粗提代谢物对根癌农杆菌T-37抑细菌效果为水>乙酸乙酯>正丁醇>石油醚;对青枯雷尔氏菌Q11-2抑细菌效果为乙酸乙酯>水=正丁醇>石油醚;对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1抑细菌效果为水>正丁醇=乙酸乙酯>石油醚。综合分析,因水、正丁醇层粗提物溶剂极性太大,不便于分离,故选择极性适中、对三种细菌抑细菌活性均较强的乙酸乙酯层作为L2活性部位,共获取乙酸乙酯层活性粗提物814.8g,得率为2.33%。2、利用生物活性追踪,对乙酸乙酯层活性粗提物继续进行分离纯化,最终得到4种单体化合物,采用1H-NMR、13C-NMR和EI-MS等方法鉴定,确定单体化合物J-1为芥酸酰胺,初步鉴定确定单体化合物J-3、J-4为同一种物质,合并后统一编号为J-3,其具体结构还未鉴定出,单体J-2、J-5尚在鉴定中。3、对分离得到的单体化合物J-1、J-2、J-3、J-5进行抗菌活性筛选,结果显示:终浓度为1mg/mL的J-1、J-2、J-3、J-5对指示菌T-37的抑细菌率分别为45.6±0.38%、66.55±0.58%、10.42±0.29%、80.00±0.62%;对指示菌Q11-2抑细菌率分别为50.05±0.49%、86.03±0.36%、88.94±0.32%、81.01±0.41%;对指示菌EC-1的抑细菌率分别为48.40±0.52%、3.57±0.42%、76.39±0.63%、5.13±0.36%。单体化合物J-3对三种病原细菌均有75%以上的抑细菌活性,故选用J-3对其抑细菌机制进行初步研究。4、以三种病原细菌为指示菌对单体化合物J-3的抑细菌机理进行初探。J-3对T-37、Q11-2、EC-1的IC50分别0.896±0.038mg/mL、0.735±0.067mg/mL、0.952±0.05mg/mL。IC50浓度下J-3处理病原细菌发现菌体细胞均出现不同程度的皱缩、破裂甚至干瘪;J-3会使病原菌细胞膜通透性增大,导致电解质外泄;会破坏细胞膜完整性,致使核酸、蛋白质、可溶性糖等大分子物质大量外渗;随J-3作用时间的延长,三种指示菌的磷代谢失常,细胞正常代谢活动受到影响;T-37、Q11-2菌体总蛋白表达量明显下降,EC-1总蛋白表达影响不大,说明J-3会抑制T-37、Q11-2蛋白的合成。