论文部分内容阅读
EV71近年来在全球广泛流行,在中国大陆地区的流行形势尤其严重。其传染途径多样、隐形感染彤势严重、传播速度快、感染敛病机制复杂、致病重症患者和死亡患者数目较高。因此,迫切需要行之有效的疫苗和治疗药物来有效控制EV71的流行和感染。但日前有关EV71中和表位和抗原性的认识还十分不足,严重制约了疫苗和治疗药物的研究。本研究通过构建EV71特异的单克隆抗体库,进而建立了一套中和单抗盘,并应用于EV71抗原性质研究,为疫苗株的选择提供了新的评估工具;同时探索建立了逃逸病毒方法学以鉴定EV71构象中和表位,并系统地研究了EV71主要抗原性区域的组成和分布特征,为疫苗研制和抗体治疗奠定了基础。具体研究内容如下:
首先,利用分子进化分析和免疫原性分析方法,从18株EV71代表株中选择病毒株Jiangsu作为免疫原制备出186株EV71特异性单抗,为后续研究奠定了基础。
其次,对EV71单抗库进行了全面的性质鉴定,发现大量构缘型中和单抗,通过鉴定中和单抗中和能力等性质,建立由11株代表株构成的抗EV71中和单抗盘(mAbpanel)。
第三,为系统认识构象型中和单抗的表位结构特征,本研究探索了逃逸病毒鉴定EV71中和表位的可行性。以线性中和单抗K8G2为模型,探索建立逃逸突变相关的方法学,并证实利用逃逸突变分析方法对K8G2识别表位的鉴定结果与利用表位步移方法的鉴定结果基本一致,表明该方法用于鉴定EV71中和表位是有效可行的。
第四,利用已建立的逃逸病毒方法学平台,对单抗盘各代表性中和单抗识别表位进行系统鉴定。结合逃逸突变病毒与单抗的反应性变化和同源模建研究结果,确定了EV71三个主要的构象型中和表位区,分别是Site1(VP1:215,217,218,220;VP2:141;VP3:182),Site2(VP1:292;VP2:223,224,225;VP3:59,60,63,64,67,74,210)和Site3(VP1:97,99,104,108,166,167,242),因而阐明了EV71构象型中和表位的定位、组成以及主要抗原性位点的分布规律,为EV71疫苗的研制提供了重要的理论基础。