基于中医分期辩证探讨股骨头坏死早期局部HIF-1α与VEGF表达的实验研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haosy2966
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目的:为了研究临床最常用的三期四型辨证法的证型与HIF-1α信号通道之间存在的联系,本实验选取早期股骨头坏死两种证型,即气滞血瘀型(创伤性)及痰瘀阻络型(非创伤性),通过两种阵型股骨头坏死中HIF-1α的表达情况,探究它们之间存在的相互联系及意义。进一步研究HIF-1α通道及下游转录因子VEGF在早期股骨头坏死中不同区域的表达情况及相互联系,为研究早期股骨头坏死的发病机制为其临床治疗及药物研究提供理论依据。  方法:标本由早期股骨头缺血性坏死ARCOⅡ期患者20例为实验组及新鲜股骨颈骨折患者行人工全款关节置换术后自愿捐献的股骨头标本20例为对照组。实验组:ARCO分期标准(Ic-IIb)。实验组中各个早期股骨头缺血性坏死标本取健存区(B组),修复区(C组),坏死区(D组)。实验组20髋分为两组,每组各10髋,一组气滞血瘀组;另一组为另一组为痰瘀阻络组。对照组(A组)为适合并接受髋关节置换治疗的近期股骨颈骨折患者。对照组中股骨颈骨折患者为新鲜骨折(骨折后1周内手术),股骨头内骨组织结构与正常股骨头非常接近。通过Western blot检测技术检测各个区域HIF-1α与VEGF的蛋白表达量。采用SPSS20.0对数据进行统计处理及结果分析。  结果:Western blot检测到各组的VEGF/β-actin蛋白相对表达量为:A组(0.854±0.677)、B组(0.878±0.056)、C组(1.167±0.080)、D组(0.553±0.051),VEGF蛋白条修复区条带表达量明显比与对照组、健存区、坏死区的蛋白表达含量多,在坏死区域的表达量是最少的而健存区与对照组即骨折区的蛋白表达量无明显差别。根据VEGF/β-actin蛋白相对表达量在各个不同区域的比较发现除了对照组(A组)健存区(B区)无明显差别(P>0.05)外其他区域的比较均有明显差异(P<0.01)。各组的Hif-1a/β-actin蛋白相对表达量为:A组(0.854±0.677)、B组(0.878±0.056)、C组(1.167±0.080)、D组(0.553±0.051),Hif-1a蛋白条修复区条带表达量明显比与对照组、健存区、坏死区的蛋白表达含量多,在坏死区域的表达量是最少的而健存区与对照组即骨折区的蛋白表达量无明显差别。根据HIF-1α/β-actin蛋白相对表达量在各个不同区域的比较发现除了对照组(A组)健存区(B区)无明显差别(P>0.05)外其他区域的比较均有明显差异(P<0.01)。将各个组的VEGF、HIF-1α相对含量数据进行相关分析并绘制成散点图,结果显示A组的VEGF、HIF-1α相对含量值Pearson相关系数r=0.800,P<0.01;B组的VEGF、HIF-1α相对含量值Pearson相关系数r=0.689,P<0.01;C组的VEGF、HIF-1α相对含量值Pearson相关系数r=0.874,P<0.01;D组的VEGF、HIF-1α相对含量值Pearson相关系数r=0.985,P<0.01;说明两者之间存在线性相关关系,即各组间VEGF与 HIF-1α之间相对表达量呈正相关关系。Western blot检测到气滞血瘀组的VEGF/β-actin蛋白相对表达量为:B组(0.884±0.057)、C组(1.165±0.080)、D组(0.551±0.054)。在痰瘀阻络组的VEGF/β-actin蛋白相对表达量为: B组(0.872±0.057)、C组(1.170±0.074)、D组(0.556±0.050),VEGF蛋白条修复区条带表达量明显比与健存区、坏死区的蛋白表达含量多,在坏死区域的表达量是最少。而气滞血瘀型和痰瘀阻络型B、C、D三个区域的表达比较结果显示(P>0.05),无统计学意义。Western blot检测气滞血瘀组的HIF-1α/β-actin蛋白相对表达量为:B组(0.475±0.064)、C组(1.190±0.063)、D组(0.358±0.073),在痰瘀阻络组的HIF-1α/β-actin蛋白相对表达量为:B组(0.479±0.042)、C组(1.194±0.059)、D组(0.362±0.065)。HIF-1α蛋白条修复区条带表达量明显比健存区、坏死区的蛋白表达含量多,在坏死区域的表达量是最少。气滞血瘀型和痰瘀阻络型B、C、D三个区域的HIF-1α/β-actin蛋白相对表达量比较结果显示(P>0.05),无统计学意义。  结论:(1)本实验通过对股骨头坏死早期不通区域的HIF-1α与VEGF的表达相对含量不同,在坏死区域的表达最低,可能是坏死区域出现局部血管生成,成骨分化能力不足而导致的修复能力不足,最终发生坏死的原因。在修复区中HIF-1α与VEGF的表达相对含量较高可能是因为缺氧而激活了HIF-1α信号通道激活下游的因子VEGF出现自身修复反应。(2)本实验中HIF-1α与VEGF蛋白相对含量之间的表达呈正相关说明二者之间有密切的联系,HIF-1α信号通道及下游因子之间的的联系还需要更深入的挖掘。(3)通过本实验结果可以推测如果坏死区HIF-1α与VEGF的表达含量增加可以促进血管再生、坏死吸收、新骨形成的自身修复反应能力从而达到治疗或者预防早期股骨头坏死进一步发展。(4)气滞血瘀型和痰瘀阻络型两组中各个区域HIF-1α与VEGF的表达量无明显差距。可见从HIF-1α信号通道来说,两种证型的发病病因虽然不同,但是病理转归是一致的,其发病机制都是缺血缺氧。
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