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前言：
银屑病,是一种常见的慢性复发性炎症性疾病,其主要病理表现为角质细胞增殖分化异常,角化不全,研究发现,银屑病皮损中浸润的单一核细胞对角质细胞的增殖分化有一定影响,其中最重要的是T淋巴细胞。白细胞介素-21(IL-21)由活化的CD4CT细胞(特别是炎症性的Th17细胞亚群)和自然杀伤性T细胞分泌,其在多种自身免疫性疾病中高表达,有研究证实银屑病患者皮损中IL-21表达量较正常高,离体情况下IL-21可以促进角质形成细胞增殖,而其在银屑病患者血液中的表达尚不清楚,为此,我们将通过研究IL-21在银屑病患者血液中表达情况及其对HaCaT细胞是否有促增殖作用,探讨IL-21在银屑病发病中的可能机制。
材料和方法：
一、研究对象
(一)病例组
银屑病患者31例,均来中国医科大学附属第一医院住院患者,其中男22例,女9例,年龄21-57岁,平均年龄36岁。
(二)对照组
健康志愿者16例,其中男8例,女8例,年龄20-55岁,平均年龄34岁。
患者及志愿者入组前均签署知情同意书。
(三)入组标准
1、年龄＞60岁或＜20岁
2、近三个月未用免疫抑制性药物
3、无肿瘤及其他自身免疫性基础疾病
4、近两周无感染史
5、疾病处于进展期
二、试剂
人IL-21检测ELISA试剂盒购自R&D公司。重组人IL-21(rIL-21)购自美国Peprotech公司,CCK8购自Ribeiro同仁化学研究所。DMEM高糖培养液、胎牛血清、PBS及1％青链霉素购自美国Hyclone公司,DMSO购自solarbio公司。
三、方法
(一)EUSA法检测血清IL-21的含量
取银屑病患者及健康志愿者外周静脉血,离心分离血清,操作步骤参照试剂盒的说明书进行。
(二)HaCaT细胞准备
将液氮冷冻的HaCaT细胞复苏后培养于培养瓶,按时换液传代,调整细胞密度为2×106/L。
(三)细胞培养
将上述调整密度后的HaCaT细胞培养于96孔板中,每孔1ml,每个培养条件设10个复孔,在IL-21浓度分别为30ng/ml、50ng/ml、70ng/ml及100ng/ml条件下置于37℃、50ML/LCO2孵箱中培养。
(四)细胞增殖程度分析
不同刺激条件下的HaCaT细胞培养48小时后,加入CCK-8(10μl)置于37℃、50ML/LCO2孵箱中分别培养2小时后,酶标免疫检测仪测OD(450nm)值。
结果：
1、病例组较对照组血清中IL-21的含量明显升高
与对照组相比,病例组血清中IL-21的含量显著升高。
2、IL-21刺激HaCaT细胞的增殖情况
IL-21可明显刺激HaCaT细胞增殖。