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目的：
本研究以急性炎性痛小鼠模型为实验对象，结合腺苷A1受体(A1R)及A2A受体(A2AR)激动剂与拮抗剂，从行为与电生理两个角度来研究正常及病理情况下，腺苷A1R、A2AR与痛觉以及针刺镇痛的关系；以及中等剂量的咖啡因对针刺镇痛效应的影响。
方法：
从美国Jackson公司引进腺苷A1R敲除小鼠，doral-tmlb(KOMP)Wtsi/J，子代经过合笼繁殖种类有纯合子小鼠(A1R-/-)及其野生型小鼠(A1R+/+)。动物分组：每种基因小鼠分为正常组及其模型组，模型组给予足底注射福尔马林造成急性炎性痛模型。将正常组与模型组每组又分为对照组及药物组，每组各15只小鼠。检测指标：①行为学实验：分别检测正常情况下及造模后电针干预前后机械缩足反射潜伏期(paw mechanical withdrawal latency，PMWL)和热缩足反射潜伏期(paw thermal withdrawal latency，PTWL)；②电生理学实验：分别检测每组伤害性刺激引起的股二头肌肌电(electromyogram，EMG)频率。干预措施：行为学实验在上述正常鼠及模型鼠中分别使用电针(electroacupuncture，EA)针刺在环跳穴(GB30)干预10min，分别检测电针干预前后PMWL与PTWL；电生理学实验则观察针刺干预前股二头肌肌电反射情况及针刺干预1min后0-5min内股二头肌肌电反射情况。行为学及电生理实验药物组皆为每组分别腹腔注射咖啡因(Caffeine)，腺苷A1R激动剂环戊腺苷(N6-cyclopentyladenosine，CPA)及腺苷A1R拮抗剂8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine，DPCPX)，腺苷A2AR的激动剂2-(4-[2-羧基乙基])苯乙基氨基-5’-N-乙基甲酰胺-腺苷盐酸盐(2-(4-[2-carboxyethyl])-phenethylamino-5-N-ethylcarboxamidoadenosine-hydroch-loride，CGS)和腺苷A2AR拮抗剂5-氨基-7-β-苯乙基-2-(8-呋喃基)吡唑并[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(5-amino-7-(beta-phenylethyl)-2-(8-furyl)-pyrazolo-[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidine，SCH)进行干预。
结果：
1.行为学实验结果表明：
①行为学电针及药物后基础值结果表明：在正常动物，EA与CPA均能提高野生鼠机械痛和热痛阈值(P＜0.001，P＜0.01)，而对基因鼠无效(P＞0.05)；模型后上述干预对野生鼠有类似效应，提示电针有类似于A1R激动剂的作用；中等剂量Caffeine可以降低小鼠痛阈水平(P＜0.001)，产生与A1R拮抗剂DPCPX相近作用；此外，SCH能提高两种模型鼠痛阈(P＜0.001)，提示在病理状态下，阻断A2AR可以镇痛。②药物对针刺镇痛效应结果表明：在正常及模型动物，中等剂量的Caffeine可以逆转针刺对A1R+/+小鼠的镇痛效应(P＜0.001)，提示中等剂量咖啡因可以通过拮抗腺苷A1R降低小鼠痛阈水平，并削弱针刺镇痛效应；CPA促进野生鼠针刺镇痛效应(P＜0.001)；而对于基因鼠仅观察到模型后SCH促进针刺镇痛效应(P＜0.05)。提示正常和病理情况下A1R的激活参与野生鼠的针刺镇痛效应，阻断A2AR仅参与基因鼠病理情况下的针刺镇痛效应的产生。
2.电生理学实验结果表明：
①0.5Tc、1.0Tc电针及手针都可以抑制正常野生鼠C反射，使用A1R激动剂CPA可以促进针刺的镇痛效应(P＜0.001)；SCH仅对0.5Tc电针镇痛效应有放大(P＜0.05)。对于基因敲除动物，上述刺激均没有镇痛效应，而使用SCH后在0.5Tc、1.0Tc电针出现明显镇痛效应(P＜0.05)。提示正常情况下激活A1R参与正常动物针刺镇痛，而阻断A2AR在基因鼠中可以产生针刺镇痛效应。咖啡因可以产生与腺苷A1R拮抗剂相类似作用(P＜0.001)，削弱针刺对野生鼠C纤维反射的抑制效应，提示咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺效应；②模型后，CPA可以明显促进野生鼠电针抑制C反射的效应(P＜0.05)；对于基因鼠而言针刺镇痛作用消失，而使用SCH后针刺镇痛作用明显(P＜0.001)。提示病理情况下，如果A1R缺失，阻断A2AR可以促进针刺镇痛效应的产生。咖啡因可以产生与腺苷A1R拮抗剂相类似作用(P＜0.001)，削弱针刺对野生鼠C纤维反射的抑制效应，提示咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺效应；
结论：
1.在生理或病理状态下，激活A1R均促进野生鼠针刺镇痛效应，而对纯合子无效；
2.中等剂量的咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺镇痛效应；
3.在生理状态下，激活A2AR有痛敏作用；而在炎性痛病理情况下，阻断A2AR尤其在腺苷A1R缺失情况下可以产生针刺镇痛效应。
本研究以急性炎性痛小鼠模型为实验对象，结合腺苷A1受体(A1R)及A2A受体(A2AR)激动剂与拮抗剂，从行为与电生理两个角度来研究正常及病理情况下，腺苷A1R、A2AR与痛觉以及针刺镇痛的关系；以及中等剂量的咖啡因对针刺镇痛效应的影响。
方法：
从美国Jackson公司引进腺苷A1R敲除小鼠，doral-tmlb(KOMP)Wtsi/J，子代经过合笼繁殖种类有纯合子小鼠(A1R-/-)及其野生型小鼠(A1R+/+)。动物分组：每种基因小鼠分为正常组及其模型组，模型组给予足底注射福尔马林造成急性炎性痛模型。将正常组与模型组每组又分为对照组及药物组，每组各15只小鼠。检测指标：①行为学实验：分别检测正常情况下及造模后电针干预前后机械缩足反射潜伏期(paw mechanical withdrawal latency，PMWL)和热缩足反射潜伏期(paw thermal withdrawal latency，PTWL)；②电生理学实验：分别检测每组伤害性刺激引起的股二头肌肌电(electromyogram，EMG)频率。干预措施：行为学实验在上述正常鼠及模型鼠中分别使用电针(electroacupuncture，EA)针刺在环跳穴(GB30)干预10min，分别检测电针干预前后PMWL与PTWL；电生理学实验则观察针刺干预前股二头肌肌电反射情况及针刺干预1min后0-5min内股二头肌肌电反射情况。行为学及电生理实验药物组皆为每组分别腹腔注射咖啡因(Caffeine)，腺苷A1R激动剂环戊腺苷(N6-cyclopentyladenosine，CPA)及腺苷A1R拮抗剂8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine，DPCPX)，腺苷A2AR的激动剂2-(4-[2-羧基乙基])苯乙基氨基-5’-N-乙基甲酰胺-腺苷盐酸盐(2-(4-[2-carboxyethyl])-phenethylamino-5-N-ethylcarboxamidoadenosine-hydroch-loride，CGS)和腺苷A2AR拮抗剂5-氨基-7-β-苯乙基-2-(8-呋喃基)吡唑并[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(5-amino-7-(beta-phenylethyl)-2-(8-furyl)-pyrazolo-[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidine，SCH)进行干预。
结果：
1.行为学实验结果表明：
①行为学电针及药物后基础值结果表明：在正常动物，EA与CPA均能提高野生鼠机械痛和热痛阈值(P＜0.001，P＜0.01)，而对基因鼠无效(P＞0.05)；模型后上述干预对野生鼠有类似效应，提示电针有类似于A1R激动剂的作用；中等剂量Caffeine可以降低小鼠痛阈水平(P＜0.001)，产生与A1R拮抗剂DPCPX相近作用；此外，SCH能提高两种模型鼠痛阈(P＜0.001)，提示在病理状态下，阻断A2AR可以镇痛。②药物对针刺镇痛效应结果表明：在正常及模型动物，中等剂量的Caffeine可以逆转针刺对A1R+/+小鼠的镇痛效应(P＜0.001)，提示中等剂量咖啡因可以通过拮抗腺苷A1R降低小鼠痛阈水平，并削弱针刺镇痛效应；CPA促进野生鼠针刺镇痛效应(P＜0.001)；而对于基因鼠仅观察到模型后SCH促进针刺镇痛效应(P＜0.05)。提示正常和病理情况下A1R的激活参与野生鼠的针刺镇痛效应，阻断A2AR仅参与基因鼠病理情况下的针刺镇痛效应的产生。
2.电生理学实验结果表明：
①0.5Tc、1.0Tc电针及手针都可以抑制正常野生鼠C反射，使用A1R激动剂CPA可以促进针刺的镇痛效应(P＜0.001)；SCH仅对0.5Tc电针镇痛效应有放大(P＜0.05)。对于基因敲除动物，上述刺激均没有镇痛效应，而使用SCH后在0.5Tc、1.0Tc电针出现明显镇痛效应(P＜0.05)。提示正常情况下激活A1R参与正常动物针刺镇痛，而阻断A2AR在基因鼠中可以产生针刺镇痛效应。咖啡因可以产生与腺苷A1R拮抗剂相类似作用(P＜0.001)，削弱针刺对野生鼠C纤维反射的抑制效应，提示咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺效应；②模型后，CPA可以明显促进野生鼠电针抑制C反射的效应(P＜0.05)；对于基因鼠而言针刺镇痛作用消失，而使用SCH后针刺镇痛作用明显(P＜0.001)。提示病理情况下，如果A1R缺失，阻断A2AR可以促进针刺镇痛效应的产生。咖啡因可以产生与腺苷A1R拮抗剂相类似作用(P＜0.001)，削弱针刺对野生鼠C纤维反射的抑制效应，提示咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺效应；
结论：
1.在生理或病理状态下，激活A1R均促进野生鼠针刺镇痛效应，而对纯合子无效；
2.中等剂量的咖啡因可以通过拮抗A1R削弱针刺镇痛效应；
3.在生理状态下，激活A2AR有痛敏作用；而在炎性痛病理情况下，阻断A2AR尤其在腺苷A1R缺失情况下可以产生针刺镇痛效应。