【摘 要】
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目的:探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在星形胶质细胞低血糖性水肿中所起的作用及其相关作用机制。方法:(1)在严重低血糖条件下(0.2m M葡萄糖)检测原代星形胶质细胞和星形
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目的:探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在星形胶质细胞低血糖性水肿中所起的作用及其相关作用机制。方法:(1)在严重低血糖条件下(0.2m M葡萄糖)检测原代星形胶质细胞和星形胶质细胞系CTX-TNA2细胞体积的变化情况;(2)检测原代星形胶质细胞和CTX-TNA2星形胶质细胞中水通道蛋白4的表达情况;(3)构建带EGFP标签的野生型AQP4并转染至CTX-TNA2细胞中,建立表达AQP4蛋白的细胞模型,同时予以低血糖(0.2m M葡萄糖)干预,24小时后观察表达AQP4细胞体积的变化情况;(4)使用AQP4 Si RNA抑制原代星形胶质细胞AQP4的表达,予以上述处理后比较低血糖时AQP4抑制组和对照组细胞体积的变化情况,进一步验证实验结果;(5)构建突变型p EGFP-C2-AQP4-M23质粒:S111A和S180A,检测这两种突变型蛋白在低血糖性细胞水肿中的作用效果。所收集的实验数据使用SPSS Statistics 16.0对结果进行统计学分析。结果:(1)在长时间严重低血糖条件下原代星形胶质细胞出现细胞水肿,而CTX TNA细胞无此现象;(2)原代星形胶质细胞表达水通道蛋白4而CTX-TNA2细胞系不表达;(3)CTX-TNA2细胞转染AQP4-EGFP质粒后24小时可见绿色荧光蛋白表达,并可被特异性的AQP4抗体所识别,成功构建了AQP4示踪系统;同时,在严重低血糖条件下,过表达AQP4的CTX-TNA2细胞与野生型CTX-TNA2细胞相比细胞体积明显变大;(4)抑制原代星形胶质细胞AQP4蛋白的表达后低血糖条件下细胞水肿的现象消失;(5)低血糖处理24h后,表达野生型AQP4和S180A突变AQP4的CTX-TNA2细胞体积明显大于对照组,而表达S111A型AQP4蛋白的细胞体积与对照组无明显差别。结论:低血糖性星形胶质细胞水肿的形成过程中需要AQP4的参与,在这一过程中AQP4蛋白的第111位丝氨酸活化起到了关键作用。
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