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多沙唑嗪中文全称为甲磺酸多沙唑嗪(doxazosin mesylate,DOX)属喹啉类高选择性α1肾上腺素受体阻断剂,是临床上用于治疗良性前列腺增生合并下尿路症状的一线药物,也是高血压治疗推荐方案中的常用添加药物。多沙唑嗪分子结构中存在一个手性碳原子,为手性药物,临床应用其消旋体(由等量左旋多沙唑嗪和右旋多沙唑嗪组成)。动物实验研究表明,两个对映体在药代动力学、药理作用和毒性作用方面有明显的手性差异;在治疗良性前列腺增生方面,左旋多沙唑嗪可能具有一定的优势。众所周知,药物的效应与血液中药物的浓度有密切关系,多沙唑嗪亦是如此。研究表明生物体内多沙唑嗪作为α1受体阻断剂的药理作用与血中多沙唑嗪的浓度有直接关系。另外,血药浓度监测可以为临床合理、安全用药提供依据。随着仪器分析技术的发展,越来越多的新技术被用于药物血药浓度的检测,推动了体内药代动力学的发展。尤为重要的是质谱技术的发展,为药物代谢动力学及代谢组学的发展奠定了基础。生物样品中多沙唑嗪的含量测定,多采用HPLC-UVD、HPLC-FLD、HPLC-MS方法,但最低定量限均未超过0.1 ng·m L-1。然而,对于多沙唑嗪药代动力学研究需要更低的血药浓度和更灵敏的多沙唑嗪血药浓度检测方法。本文建立了大鼠血浆左旋多沙唑嗪微量检测的SPE-LC-MS/MS方法,最低定量限为10.4 pg·m L-1,该法同样适用于右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪生物样本的检测。同时,我们采用LC-MS/MS法对消旋多沙唑嗪静脉注射后在大鼠体内的药代动力学及代谢产物进行了研究。第一部分大鼠血浆中左旋多沙唑嗪SPE-LC-MS/MS分析方法的建立目的:目前多沙唑嗪及其对映体的生物样本最低定量限未超过0.1ng·m L-1,本研究建立了一种新的大鼠血浆左旋多沙唑嗪微量检测的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法:血浆样本加入内标哌唑嗪后经C18固相萃取小柱萃取,碱性条件下采用ACQUITY BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱进行分离,流速为0.45 m L·min-1。在正离子模式下以MRM(多反应离子监测)方式测定左旋多沙唑嗪的含量。结果:左旋多沙唑嗪和内标物分离良好,保留时间分别为0.47和0.35min,且血浆中内源性物质不干扰左旋多沙唑嗪及内标物的测定。左旋多沙唑嗪在10.4 pg·m L-1~13 ng·m L-1范围内线性关系良好(r=0.9922),最低定量限为10.4 pg·m L-1。采用提取后加入法及柱后灌注法评价左旋多沙唑嗪血浆样本的基质效应,不存在明显的基质效应。应用本法可测定大鼠尾静脉注射左旋多沙唑嗪(3 mg·kg-1)48 h后的血药浓度,结果为0.0344±0.0102 ng·m L-1。结论:所建立的SPE-LC-MS/MS分析方法特异性强,灵敏度高,适用于左旋多沙唑嗪的血药浓度测定,也为其他药物血药浓度的分析提供了参考。第二部分大鼠静脉注射消旋多沙唑嗪的药代动力学及其代谢产物研究目的:研究大鼠静脉注射消旋多沙唑嗪的药代动力学,采用LC-MSn方法鉴定大鼠体内消旋多沙唑嗪的代谢产物。方法:消旋多沙唑嗪药代动力学研究:取SD大鼠6只,静脉注射消旋多沙唑嗪溶液(0.686 mg·kg-1)后,于给药后不同时间用肝素化毛细管经大鼠眼底静脉丛取血,血样采集时间为72 h。采用液液萃取法进行血浆样品预处理,萃取溶液为正己烷-乙酸乙酯(1:1 v/v)混合溶液。应用高灵敏度的UPLC-MS/MS方法测定每一受试动物各取血点的血药浓度。色谱条件:Hypersil Gold C18(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,柱温35℃;流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱方式;流速0.35 m L·min-1。Win Nonlin 5.1软件进行药时曲线拟合,并采用静脉单次给药及双房室模型计算消旋多沙唑嗪药代动力学参数。消旋多沙唑嗪代谢产物研究:用高分辨质谱Orbitrap Fusion技术对消旋多沙唑嗪在大鼠体内的代谢产物进行鉴定。结果:采用双房室模型计算大鼠静脉注射消旋多沙唑嗪的药代动力学参数,消旋多沙唑嗪的主要药代动力学参数t1/2β为(1.44±0.27)h,AUC0-t为(403.63±50.88)h·ng·m L-1,其中t1/2β与本实验室前期研究结果t1/2β(1.41±0.15)h基本一致。我们共检测到9个代谢产物:3个单羟基化产物、1个氧去甲基产物、1个哌嗪环羟基化后脱水产物,此外还发现了M4(m/z 451.1612)、M5(m/z 470.2034)、M6(m/z 466.1721)、M7(m/z422.1459)产物。其中羟基化、氧去甲基、哌嗪环羟基化后脱水产物已有报道;M4-M7为首次发现。原形药消旋多沙唑嗪经过哌嗪环羟基化后脱水、羟基化和脱氨基反应生成M4;苯并二噁烷环羟基化后开环生成M5;哌嗪环羟基化后脱水和羟基化反应生成M6;哌嗪环羟基化后脱水和氧去甲基反应生成M7。结论:延长血浆样本采集时间至48 h时,大鼠体内消旋多沙唑嗪消除半衰期与文献报道一致;同时,我们在大鼠体内发现了未曾报道的4个可能的代谢产物(M4-M7),其代谢修饰过程比已知代谢物的化学反应途径更为复杂。