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本研究旨在应用核糖体展示技术筛选出与人肝癌细胞特异性结合的单链抗体，以期有助于肝癌的靶向治疗。
首先，以培养的人肝癌细胞HepG2 免疫Balb/c 小鼠，每隔两周免疫一次，共免疫4 次。4 次免疫后，取小鼠脾脏并分离总RNA，设计简并引物，逆转录合成第一条链，PCR 扩增小鼠重链可变区VH和轻链κ。通过重叠延伸PCR，经linker DNA 连接形成VH/κ核糖体展示抗体库。
从构建的抗人肝癌HepG2 细胞单链抗体库中，应用核糖体展示技术筛选抗HepG2的单链抗体。所构建的单链抗体库，经过体外转录翻译后，形成“单链抗体-核糖体-mRNA”三元复合物，并以此进行体外的筛选。先以人正常肝细胞WRL-68 负筛，再以HepG2 为抗原进行筛选。经过三轮筛选，RT-PCR 扩增单链抗体片段并连接到pEASY-E1 表达载体中，转化E. Coli DH 5α，挑取单克隆，菌落PCR 鉴定表达方向正确的阳性重组子，提取表达方向正确的阳性重组子，转化E. Coli BL21（DE3），IPTG 进行诱导表达，经过镍柱亲和纯化后，细胞ELISA检测表达的单链抗体对HepG2的亲和力。
我们开创性地以完整的细胞为抗原进行核糖体展示筛选，经过三轮筛选后，获得了一株对HepG2 有特异性亲和力的单链抗体，在肝癌的靶向给药方面具有潜在的应用价值。