三个莱茵衣藻光呼吸途径基因的敲减研究

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光呼吸途径是保证衣藻正常生长的必要途径之一。SGAT(丝氨酸∶乙醛酸氨基转移酶)、GDH(乙醇酸脱氢酶)和PGP(磷酸乙醇酸磷酸酶)是衣藻光呼吸途径中的三种关键酶。  本论文以莱茵衣藻为材料,通过构建此三种关键酶的RNAi载体,利用玻璃珠转化获得该三种基因的敲减株系,进而研究此三种关键酶的功能。  经过实验室前期工作的积累,目前已经获得了转质粒pARG7.8ψ3回补CW15精氨酸缺陷的对照株系,并完成分子鉴定和生理测定。本研究发现:转化株系的细胞生长速度高于CW15,以1-4、1-5、2-3和2-4这四株最明显,且其生长速度稳定;正常光照培养,与CW15株系相比,pARG7.8转化株系的叶绿素a含量降低,而叶绿素b含量增加,总叶绿素含量则无显著差异;精氨酸明显抑制转化株系细胞生长。因此,选择回补精氨酸的pARG7.8株系1-4和1-5作为基因敲减株系的对照株系。  本实验室成功获得不同敲减水平的六株SGAT敲减株系A、S、T、A2、S2、T1。取一天之中MOD、EOD、EON这三个时间点对这六个株系进行mRNA水平的半定量分析,结果发现:A、S2、T1的SGAT基因敲减程度比较大;SGAT的转录水平随光周期变化,从MOD到EOD其转录水平降低,到EON则上调到MOD水平。生理测定结果表明:在光照时,敲减SGAT后一定程度上影响了衣藻的生长;而在黑暗条件下,敲减SGAT则有可能促进衣藻生长。在光照和黑暗条件下,SGAT敲减株系叶绿素含量下降,这说明SGAT可能与衣藻叶绿素代谢相关。  对PGP RNAi载体进行构建,并进行玻璃珠转化,成功获得四株敲减株系P3、P4、P5、P6,分子鉴定表明该四株株系为PGP敲减株系。对本实验室获得的18株GDH敲减株系进行分子鉴定,结果证明G1-4和I6、7、20是GDH RNAi的转化株系。
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