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目的：
构建粉尘螨I类变应原（Derf1）瞬时表达载体TRBO-Derf1，观察其在烟草中的表达并探讨烟草表达的Derf1疫苗免疫治疗过敏性哮喘的疗效。
方法：
1.重组质粒TRBO-Derf1的构建及在烟草叶片中的表达
以粉尘螨总RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增Derf1基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO，转化根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV3101株后，抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。将含TRBO-Derf1重组质粒的GV3101注射本氏烟叶片，SDS-PAGE电泳检测注射3、4、5、6天后Derf1的表达。
2.烟草表达的粉尘螨I类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究
100只BALB/c小鼠随机分为5组，分别为PBS组即阴性对照组，阳性对照卵白蛋白(OVA)组，原核表达Derf1(pDerf1)组，烟草表达Derf1(tDerf1)组，烟草表达蛋白免疫治疗组(tDerf1-T)，PBS组用PBS，其余4组分别用OVA、pDerf1、tDerf1、tDerf1致敏激发BALB/c小鼠，于0、7、14天腹腔注射致敏，第21天雾化吸入激发，连续7天，24h后，各组小鼠引颈处死;保留tDerf1-T组继续用tDerf1免疫治疗;通过肺组织病理切片观察小鼠肺部炎症;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞及分类计数;ELISA法检测BALF、脾细胞培养上清(SCCS)的特异性细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ和血清中变应原特异性IgE、IgG1抗体浓度。
结果：
1.重组质粒TRBO-Derf1的构建及在烟草叶片中的表达
电泳及测序表明Derf1基因克隆成功，大小为627bp。经PCR及酶切反应证实重组质粒TRBO-Derf1成功转入根癌农杆菌。SDS-PAGE电泳检测表明，该蛋白于第5和6天在烟草叶片中高表达。
2.烟草表达的粉尘螨I类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究
烟草表达蛋白免疫治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻;BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、IL-4、IL-5、IL-17、血清抗原特异性IgE抗体和脾细胞分泌IL-4、IL-5、IL-17均低于阳性对照组;BALF和SCCS中IL-2、IFN-γ含量均高于阳性对照组。
结论：
构建的瞬时表达重组载体TRBO-Derf1成功表达于烟草叶片，为进一步研究粉尘螨植物疫苗奠定了基础;烟草表达的粉尘螨I类变应原疫苗免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏性炎症。