论文部分内容阅读
目的：帕金森病是第二大神经系统退行性疾病，由中脑黑质多巴胺能神经元的变性和损失引起，这种神经元的损失通常伴随着神经递质的减少，路易小体的发生，星型胶质和神经胶质的增生，临床上主要表现为静止性震颤、运动迟缓、肌肉强直和姿势步态障碍等。姜黄素是从姜科、天南星科中一些植物的根茎中提取的天然有效成分，具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、抗病原微生物、抗氧化等药理作用，但是姜黄素在体内代谢快、吸收少，生物利用度非常低，因此结构改造后去除姜黄素结构中不稳定的β-二酮基团，得到稳定性相对较好的姜黄素类似物L6H3，这可能为治疗帕金森病提供一个新选择。本文旨在探讨姜黄素类似物L6H3是否能对帕金森病具有神经保护作用，并进一步确定其作用机制。 方法：⑴大鼠帕金森模型的建立：本实验采用脑部纹状体立体定位注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）来构建帕金森大鼠模型。用阿扑吗啡诱发大鼠旋转行为来检测模型建立成功与否，剔除失败的模型动物。模型成功的大鼠随机分为四组：SHAM组，PD模型组、L6H3给药组、阳性对照药美多芭组。SHAM组只暴露大鼠颅骨不定位注射6-OHDA，PD模型组不给予药物治疗，只给予相同体积的生理盐水，L6H3给药组腹腔注射L6H3(50 mg/kg),阳性对照组给予药物美多芭。各组在造模成功后第1-4周和给药后第1，2周以及停药后第1周对大鼠进行了旋转行为的检测。收集组织样本用于石蜡切片染色、神经递质检测、氧化损伤检测、western blot蛋白表达检测以及其他。⑵细胞帕金森模型的建立：选用SH-SY5Y细胞，待细胞贴壁后，随机分成Control组、6-OHDA组、6-OHDA+L6H3组、L6H3组。Control组即为正常对照组，不加处理；6-OHDA组用100μM6-OHDA处理细胞24 h建立PD细胞模型组；6-OHDA+L6H3组在加入6-OHDA的同时还加入10μM L6H3；L6H3组则只加入10μM L6H3。收集各组样本检测细胞凋亡或收集蛋白检测相关指标。 结果：①通过腹腔注射阿扑吗啡诱导的动物旋转行为来验证模型的成功与否，造模成功率约60％。从动物旋转行为学上分析发现L6H3可以有效改善模型大鼠的帕金森病症。高效液相法检测纹状体中相关神经递质与代谢产物的含量，发现L6H3可以增加6-OHDA导致的帕金森病模型大鼠纹状体中单胺类神经递质与其代谢产物的含量，同时免疫组织化学染色和western blot结果表明L6H3还能提高纹状体中酪氨酸羟化酶的表达，并减轻多巴胺能神经元的损伤。通过检测我们还发现， L6H3能减弱6-OHDA诱导的氧化损伤，提高PD模型大鼠SOD与GSH-Px的活性，降低MDA的含量并使内质网应激相关蛋白的表达受到抑制。②在体外实验中，我们进行了细胞凋亡检测，发现L6H3能有效减少SH-SY5Y帕金森模型细胞的凋亡,促进细胞存活。L6H3也能增加TH蛋白的表达和抑制内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78和CASPASE12的表达，提示着L6H3的保护作用可能涉及到这些相关的信号通路。 结论：L6H3能改善帕金森大鼠症状，提高帕金森大鼠脑中相关神经递质的含量，提高体内外TH的表达，从而起到一个神经保护作用，并且该保护作用可能是通过激活PI3K/Akt和ERK信号通路，减缓氧化损伤和内质网应激实现。