鹰嘴豆功能成分分离分析及其豆芽分散片的制剂学研究

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鹰嘴豆(Cicer arietinumL)是豆科(Leguminosae)豌豆族(Vicieae)鹰嘴豆属(Cicer)草本植物,收载于中华人民共和国卫生部《药品标准》维吾尔药分册。据记载,鹰嘴豆具有清除异常体液,开通体液闭阻,调补机体等作用,用于身体瘦弱,性欲低下,食欲不振,皮肤瘙痒及糖尿病。在维吾尔族传统饮食中,鹰嘴豆被认为是首选用于预防肥胖、Ⅱ型糖尿病等相关慢性代谢性疾病的药食兼用植物。  近年来,研究证实豆类饮食对糖尿病、肥胖症和心血管类慢性疾病有一定预防和改善作用。同时,与鹰嘴豆营养价值相关的生理保健功能的研究也比较广泛。对鹰嘴豆化学成分和生物活性的研究报道较多,但两者的结合不够,尚未发现鹰嘴豆化学成分中有关降血糖活性的研究报道。为了进一步合理开发利用鹰嘴豆药材,探索其有效成分,阐明其抗糖尿病作用的物质基础。本文采用天然产物的分离纯化方法,结合现代分离分析技术和手段对鹰嘴豆及豆芽的化学成分进行了分离分析,并对鹰嘴豆豆芽总异黄酮部位进行纯化工艺和体外降糖活性评价。以鹰嘴豆豆芽大孔树脂纯化物为原料药粉,按照药典中规定分散片制剂工艺要求进行分散片制备及质量标准研究,以期开发一种具有抗糖尿病作用的鹰嘴豆豆芽保健食品。  本论文包括下列四个部分:  1、对鹰嘴豆及豆芽化学成分的初步研究和部分纯化物及组分的体外降糖活性评价。  采用现代分离分析技术对鹰嘴豆及其豆芽醇提物制备的不同部位进行了化学成分的分离和纯化,共分离到12个化合物和1个组分。通过ESI-MS、LC-ESI/MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC等现代波谱分析技术,共鉴定出11个化合物的结构和1个组分的主要成分,分别为:1.4,9,10,2-四羟基-4-甲氧基-5-异黄烷烯-7-酮-10-O-β-D-葡萄糖、2.4,9,10,2-四羟基-4,5-亚甲二氧基-5-异黄烷烯-7-酮-10-O-β-D-葡萄糖苷、3.3β,16β,17-三羟基贝壳杉烷-3,17-O-β-D-葡萄双糖苷、4.腺苷、5.β-胡萝卜苷、6.鹰嘴豆芽素A、7.芒柄花素、8.芒柄花苷、9.印度黄檀苷、10.(1S,3S)1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、11.L-色氨酸、大豆皂苷Bb组分。其中化合物1和化合物2归属为同一母环的新化合物;化合物3为首次从鹰嘴豆属植物中分离到的化合物。通过体外蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)抑制活性的测试,结果表明芒柄花素、芒柄花苷和以大豆皂苷Bb为主要成分的组分可能是鹰嘴豆中潜在抗糖尿病的活性成分。  2、鹰嘴豆种子及豆芽脂肪酸成分GC-MS/MS分析  对鹰嘴豆种子及豆芽中脂肪酸成分进行了GC-MS/MS分析,并对比了二者所含主要不饱和脂肪酸成分种类及含量的变化。  3、鹰嘴豆豆芽总异黄酮富集提取纯化工艺的研究。  以鹰嘴豆芽素A为对照品,对鹰嘴豆豆芽进行了提取和纯化工艺研究。通过总异黄酮提取单因素实验和正交试验,确定了豆芽总异黄酮最佳提取条件;考察了8种不同极性的大孔树脂对总异黄酮的静态吸附及解吸能力,筛选HPD-300型为最佳大孔吸附树脂;通过考察最佳上样浓度、上样流速、最大上样量、除杂溶液用量和洗脱乙醇浓度及用量等工艺参数,确定了HPD-300型大孔树脂富集纯化鹰嘴豆总异黄酮的工艺。豆芽总异黄酮纯化组分的体外PTP1B抑制活性实验,发现其抑制活性较强。  4、鹰嘴豆豆芽分散片的制剂学研究  本研究结合鹰嘴豆豆芽总异黄酮标准纯化物的性质,选用以分散片剂型为药物载体剂型,对其整个制剂工艺学进行研究。以片剂崩解时间、硬度为考察指标,筛选了崩解剂、填充剂的种类、配伍和加入方法等,确定符合分散片规定的最佳处方。按照分散片制备最佳处方,连续生产三批片剂,根据中国药典2010版的规定对该片剂建立质量评价体系,其中包括分散片的片剂检查项目,使用HPLC测定鹰嘴豆芽素A和芒柄花素两种有效成分的含量,并用紫外法对其总异黄酮成分进行体外溶出度的测定。
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