基于纳米材料荧光传感器检测赭曲霉毒素A的方法研究

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赭曲霉毒素A(OTA)是一类由青霉素属和曲霉素属的某些真菌在适宜条件下产生的次级有毒代谢产物,主要污染农作物及其制品。研究表明,OTA具有很强的肾毒性、肝毒性、免疫毒性、致癌性,对人和动物的健康造成巨大的威胁。目前,常规的检测分析方法虽然可实现OTA的灵敏检测,但这些技术昂贵、耗时且需要高精密仪器、复杂的样品制备以及专业人员操作,难以满足日常快速检测的需求。因此,建立新型、快速、灵敏的OTA检测方法,对保障食品、药材的安全以及人类健康有重大意义。荧光传感器因其具有灵敏度高、选择性好、荧光可调等优势成为检测领域的研究热点,而纳米材料具备独特的光、电性能,生物相容性好、水溶性较佳等优点成为荧光传感器的辅助手段。基于此,本课题以OTA为研究对象,利用纳米材料的不同特性以及适配体的特异性构型转换,构建了多种基于纳米材料和适配体的荧光传感器,实现了食品和中药材中OTA的检测,为快速检测OTA提供了新思路。本课题主要的研究内容和成果如下:1.基于碳纳米粒子(CNPs)氧化物和标记型适配体的荧光传感器测定OTA的研究。本研究以FAM修饰的适配体作为供体,水溶性CNPs氧化物作为受体,充分利用CNPs氧化物对适配体的单链核苷酸以及适配体与OTA结合后形成的折叠结构的敏感性差异,从而构建基于CNPs氧化物和标记型适配体的荧光传感器用于OTA的检测。利用紫外可见光谱(UV)对CNPs氧化物及其与适配体混合进行表征,并优化了CNPs氧化物的浓度及混合时间等实验条件。所构建的传感器对OTA检测的线性范围为10-80 ng mL-1,检测限(LOD)为3.681 ng mL-1,选择性较好,并成功用于红酒样品中的OTA检测,回收率为98.9%-106.11%。2.基于卟啉和量子点的非标记适配体荧光传感器测定OTA的研究。本研究以水溶性CdTe量子点(QDs)为荧光探针,四-(4-甲基吡啶基)卟啉(TMPyP)为淬灭剂,利用无修饰的适配体结合OTA后的构型转换形成反向平行的G-四链体,使得TMPyP与反向平行G-四链体结合引起荧光恢复,从而构建适配体荧光传感器用于OTA的检测。利用CD光谱对适配体与OTA形成的G-四链体进行表征,优化了TMPyP的浓度、适配体与OTA的孵育时间等实验条件。在最优的实验条件下,应用该荧光传感器对OTA进行检测,线性范围为0.2-20 ng mL-1,LOD为0.16 ng mL-1,选择性好。采用黄芪药材进行加标回收实验,回收率为98.9-102.2%之间,表明该传感器可用于实际样品中OTA的检测。3.基于自组装卟啉和ZnCdSe QD的“Turn off-on”型荧光传感器检测OTA的研究。本研究以自组装锌卟啉作为淬灭剂,水溶性ZnCdSe QDs为荧光探针,构建了“Turn off-on”型荧光传感器用于OTA的检测。利用绿色环保的十二烷基二甲基甜菜碱为软模板对四吡啶基锌卟啉(ZnTPyP)进行自组装,所形成的自组装ZnTPyP(SA-ZnTPyP)的水溶性显著提高,光学性能提升。在最佳实验条件下,荧光传感器表现出良好的检测性能,包括较宽的线性范围(0.5-80 ng mL-1),较低的LOD(0.33 ng mL-1),良好的稳定性,高选择性,较短的检测时间。本方法可以较好的应用于实际样品如牛奶和咖啡的检测中,并利用超高效液相色谱–串联质谱联用(UHPLC–MS/MS)验证了结果的准确性。
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