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马铃薯X病毒(potatovirusX，PVX)的P25蛋白是参与病毒在细胞和细胞之间运动的一个重要蛋白，它在转录后水平的基因沉默中起到抑制作用，能够提高PVX病毒侵染植物的成功率。本研究对植物病毒沉默抑制子P25进行原核表达、纯化并制备该抑制子的多克隆抗体，为下一步研究抑制子在基因沉默中的分子机理奠定基础。通过体外DNA重组技术，将来源于pBIN61-p25质粒上的目的基因p25片段在T4DNA连接酶的作用下，插入到原核表达载体pET-28a(+)的BamHⅠ和SacⅠ酶切位点之间，构建重组质粒pET-28a(+)-p25。经PCR扩增、酶切鉴定以及DNA序列分析，插入的目的基因p25的序列正确，N端与6×His标签形成融合蛋白，无移码现象。将重组质粒pET-28a(+)-p25转化到大肠杆菌BL21(DE3)，加入终浓度为1.0mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)进行诱导，诱导后表达出分子量大约为28.6kDa的P25融合蛋白。该P25融合蛋白以可溶形式存在，扩大培养按1∶40的比例浓缩后在变性条件下经Ni离子亲和层析得到纯品P25融合蛋白。用Bradford法测定给该融合蛋白含量达180μg/ml。用纯化的P25融合蛋白免疫三只6-8周龄的BALB/c小鼠(15μg/只，次)三次后，进行ELISA检测，获得的P25融合蛋白的多克隆抗体以1∶12000的比例稀释后仍可检测到0.25μg左右的抗原(融合蛋白P25)。P25融合蛋白与其多克隆抗体的Western-blot经AEC化学显色后，在硝酸纤维素膜上显示出单一的特异性条带。以上结果表明通过原核表达系统在大肠杆菌中表达出了P25融合蛋白，并且该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。获得的这种植物病毒沉默抑制子P25的多克隆抗体，可以进一步用于基因沉默机理的研究。