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随着生物工程技术和分子生物学的发展,疫苗学也发生了巨大的变革。这种变革的表现之一是基因免疫,即DNA疫苗的出现。这种新的免疫方式指通过注射或基因枪轰击的方法使携带目的基因的质粒DNA直接进入生物体的不同组织,在体内表达蛋白质,激活机体免疫系统,产生免疫保护性。已经证明DNA疫苗能够诱导包括体液免疫和细胞免疫的多种免疫反应,有效抵抗多种病原体的感染。多个试验证明,非免疫鸡接种编码新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)融合蛋白(fusion protein,F)基因的DNA疫苗,能够引起免疫应激反应,并能抵抗NDV强毒株的攻击。但是,关于编码NDV血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)蛋白的重组DNA疫苗或同时编码F和HN蛋白的重组DNA疫苗免疫试验报道鲜见报道。 新城疫(Newcastle disease,ND)是禽类的一种严重致死性疾病。该病是一种在世界各地广泛分布的高度接触性传染病,对世界各国包括发达国家和发展中国家的养禽业均造成了重大经济损失。该病病原NDV为禽副粘病毒Ⅰ型,是有囊膜的负链RNA病毒,基因组全长15,186kb,从5’到3’端依次编码RNA介导的RNA聚合酶、血凝素-神经氨酸酶、融合蛋白、基质蛋白、磷蛋白和核蛋白六种蛋白质。HN蛋白在病毒吸附宿主细胞和病毒粒子从宿主细胞内的释放过程中均发挥重要作用,F蛋白可以介导病毒与宿主细胞膜的融合,在病毒致病过程中扮演了重要角色。 应用RT-PCR方法获得了NDV强毒株F48E9 HN基因的cDNA,并克隆到真核载体pcDNA3中。对重组的pcDNA3-HN进行测序表明,HN基因全长1716bp,编码570个氨基酸残基,编码蛋白分子量为75.2kDa。F48E9 HN蛋白与已知的其它10种副粘病毒HN蛋白具有92%的同源性以上。 在本研究中,重组质粒pcDNA3-HN分别通过减毒鼠伤寒沙门氏菌和阳离子脂质体的介导转染HeLa细胞,SDS-PAGE和Western blot检测表明有一分子量为75 kDa的蛋白条带,表达产物具有免疫反应性。同时,用减毒鼠伤寒沙门氏菌携带报告基因-增强型绿荧光蛋白(enhanced green fluorescent proteins,eGFP)转染HeLa细胞也验证了这一结果。本研究所使用的F基因在此前已经获得克隆和并在真核细胞种得到了表达。