【摘 要】
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2005年瑞典科学家首次在人鼻咽分泌物中检测到了人博卡病毒Human Bocavirus(HBoV)。将Human Bocavirus(HBoV)归类于细小病毒科,博卡病毒属。博卡病毒是继呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒之后第4个最常见的呼吸道病毒。大量研究数据表明,高等生物中多达一半的DNA可以转录成RNA,而这些RNA中非编码的RNA又约占多数。非编码RNA可以参与真核基因表达的转录后调控过程。
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2005年瑞典科学家首次在人鼻咽分泌物中检测到了人博卡病毒Human Bocavirus(HBoV)。将Human Bocavirus(HBoV)归类于细小病毒科,博卡病毒属。博卡病毒是继呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒之后第4个最常见的呼吸道病毒。大量研究数据表明,高等生物中多达一半的DNA可以转录成RNA,而这些RNA中非编码的RNA又约占多数。非编码RNA可以参与真核基因表达的转录后调控过程。还可以参与调节多种生命活动。与此同时,病原微生物也进化出包括利用自身编码ncRNA在内的各种拮抗宿主天然免疫的的分子机制。核因子NF-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)是一种蛋白质复合体。几乎在所有的细胞中都能发现NF-κB,它们参与细胞对外界刺激的响应,如细胞因子、辐射、重金属、病毒等。在细胞的炎症反应、免疫应答等过程中NF-κB起到关键性作用。机体内的非编码RNA可以参与多种调控。我们推测病毒的非编码RNA可能也会对病毒的入侵或复制或对机体的天然免疫产生影响。本文重点研究了人博卡病毒的非编码RNA对NF-κB信号通路的影响,得出以下结论。一、博卡病毒的非编码RNA对NF-κB信号通路有抑制作用我们利用双荧光素酶报告系统与荧光定量PCR的技术相结合,验证博卡病毒的非编码RNA对NF-κB信号通路的影响。结果发现,与对照组相比较,在细胞转染HBoV1 ncRNA时,NF-κB的激活受到抑制。随后继续利用双荧光素酶报告系统检测HBoV1 ncRNA对NF-κB相关的信号分子IKKα、IKKβ与TRAF2的影响,结果发现HBoV1 ncRNA并不影响NF-κB上游信号分子。继续利用免疫荧光技术证明HBoV1 ncRNA并不影响p65蛋白的核易位。二、找到与HBoV1 ncRNA相互作用的蛋白并进行相关分析根据生物素与链霉亲和素可特异性结合的原理,选择利用RNA pull down和蛋白质谱检测技术相结合筛选与HBoV1 ncRNA结合的蛋白。本文共沉淀出多种与HBoV1 ncRNA相互作用的特异性和非特异性蛋白质,其中与HBoV1ncRNA特异性结合的蛋白质有406个。通过比较实验组和对照组质谱鉴定结果的差异和蛋白质相关功能,一共筛选到三种相关转录因子蛋白,分别是TAF15、TFCP2、RTF1。分析HBoV1 ncRNA可能通过与转录因子的结合来影响NF-κB信号通路的激活。
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