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蛇毒中含有多种蛋白,近年来它们的应用价值得到了世界各地研究者的高度重视,进行了大量的分离纯化和性质研究.尤其是尖吻蝮蛇的蛇毒,由于对人血液凝聚系统有作用,具有很高的医用价值,国内外的研究者都开展了广泛的研究.但是由于纯化手段的局限性,进展不大.近年来医用蛋白的发现和生产对于纯化方法的效率提出更高的要求,需要方便快速、经济、高通量的筛选方法的出现.传统的纯化方法现在正在被高选择性、针对目的产物而设计的人工亲和层析色谱代替.化学合成配基在蛋白质层析色谱中已经应用多年.尤其是组合化学技术的出现使得金属螯合配套在融合蛋白的纯化中广泛应用.该研究主要方法如下:一、采用仿生亲和的方法对尖吻蝮蛇蛇毒蛋白进行了分离纯化.经过仿生亲和平台400多种仿生配基的筛选,选择出几种在20-30Kda附近有较好专一性吸附的配基,然后进行纯化条件的优化,得到纯度较高的蛋白样品.二、得到的纯化蛋白进行一系列生物化学性质的检验,包括生物活性,热稳定性等,并运用先进的质谱和肽谱分析手段得到纯化蛋白的更多有用信息.主要研究成果如下:一、筛选出配基AT14作为纯化使用介质,该配基对蛇毒蛋白中分子量为22000Da的蛋白有特异性吸附.二、经过吸附条件优化,发现在pH7,离子强度K=1.1*10<3>us/cm的条件下吸附性能最好.经过洗脱条件优化,发现在pH8,离子强度K=4.0*10<3>us/cm条件下洗脱特异性最好.三、通过HPLC检测,纯化蛋白纯度在95﹪以上.SDS-PAGE电泳分析,发现蛋白表观分子量为22380Da,具有两个亚基,具有类凝血酶的活性,能完全降解纤维蛋白原的α链,部分降解β链.EDTA和巯基乙醇能完全抑制其活性,PMSF和Cu<2+>部分抑制活性.说明它是一种金属蛋白酶.基质辅助激光解析电离质谱测定分子量为29229.38Da,经过全肽谱分析和NCBI数据库检索,未发现匹配蛋白.结论:成功应用仿生亲和配基库对尖吻蝮蛇蛇毒进行筛选,得到配基AT14,该配基能专一性吸附22000Da附近的蛋白.通过纯化条件优化,得到了HPLC检测纯度96﹪的蛋白样品,通过一系列性质研究,确定该蛋白为类凝血酶,数据库检索结果说明此蛋白属于新发现的蛋白,值得进一步研究.