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研究背景 阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease，AD）是中枢神经系统退行性疾病之一，临床上AD患者主要表现为脑认知功能障碍，如健忘、记忆力和空间辨别能力减退以及反应迟钝等，其主要神经病理学特征有神经元减少、出现神经元纤维缠结（neurofibrillary tangles，NEF）和老年斑（senile plaque，SP）。 目前，能模拟学习记忆功能障碍的动物模型很多，但具有AD病理改变的动物模型却很少，迄今仍缺乏适用于AD研究的、公认的、理想的动物模型。因此，建立可靠的AD动物模型是AD研究的前提，具有重要的意义。 AD目前尚无满意的治疗手段，只能对症治疗。近年来，神经干细胞在胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统中的发现和体外培养的成功为AD的治疗提供了新的方法，即将体外扩增的神经干细胞移植到脑内，以替代丢失、受损的神经细胞，修复神经系统的功能。 目的 本实验将β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ）直接注射到大鼠海马CA1区，制备AD动物模型，观察其空间记忆减退的情况及病理学改变。然后用新生郑州大学2004届硕士毕业论文神经干细胞移植对AD大鼠海马神经元结构和功能的影响大鼠海马齿状回分离培养的神经干细胞，移植入AD模型大鼠海马，利用Hoechst33258标一记技术和PcNA免疫组化技术，观察神经干细胞在脑内存活和增殖的情况，并且通过对突触素免疫产物的测定来探讨其可能作用机制，从而为该病的临床治疗提供一个新的思路和一些理论依据。方法 Y迷宫筛选对电击敏感并逃避迅速的大鼠随机分成正常对照组、假手术组、AD模型组、2周移植组和4周移植组，各组n二6。大鼠双侧海马微量注射聚合态Ap，40制备AD动物模型，假手术组注入等体积生理盐水，正常对照组不施以任何处理，一周后正常对照组、假手术组、AD模型组大鼠行Y迷宫测定学习记忆能力，HE染色、刚果红染色、Gros一Bielschowsky氏银浸染色和尼氏染色检测病理变化。移植组大鼠以制备AD模型同样的方法、同样的位点将5plHoeehst33258标记的神经干细胞悬液（细胞浓度为1、105个/川）注入海马以，区。移植后2周移植组、4周移植组大鼠分别进行行为学检测和PCNA免疫组织化学染色、突触素免疫组织化学染色，并在荧光显微镜下观察移植细胞的存活情况。用捷达801系列形态分析系统定量测定尼氏染色海马CA:区锥体细胞层神经元的数目和神经元的平均光密度及突触素免疫产物的平均光密度，并进行统计学处理。结果 1.刚果红染色:可见AD模型大鼠海马注射区附近有Ap沉积。 2.Gros-Bielschowsky氏银浸染色:可见变性的神经细胞内有神经原纤维缠结。 3.尼氏染色:正常组神经细胞尼氏染色清晰均匀，细胞形态完整，排列规则、紧密，假手术组未见到明显的尼氏体缺失。AD模型组海马CAI区锥体细胞层神经元空染或淡染，分布不均，排列疏松，形态不规则。正常对照组、假手术组和AD模型组海马CA;区锥体细胞数分别为292.0土20.4、273.8士15.0、 136.8月8.1;平均光密度分别为0.24士0.02、0.23土0.01、0.16土0.02。分析显示，假手术组与正常组相比差异无统计学意义（尸>0.05）;AD模型组海马CAI区锥体细胞明显减少，平均光密度亦降低（尸<0.05）。 4.荧光显微镜观察结果:Hocchst33258标一记的移植细胞呈现黄色荧光的细塑丝大堂里鲤遏亚上毕业竣立一一.—一一拓独经王细胆登镇对渔旦大舅鱼吕搜经远结构犯边熊鱼影响胞形态，大多呈圆形，大小不一，大量分布在针道内和海马cAI区。海马cAI区内的移植细胞呈团块状生长，并沿海马长轴迁移，排列成条带状。 5.PCNA免疫组化染色:2周及4周移植组大鼠海马CA:区内有许多PCNA阳性细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒，大部分为圆形、椭圆形，染色深浅不一，胞质及胞膜无明显着色。在正常对照组和假手术组大鼠海马组织切片中几乎无阳J胜细胞。 6.突触素免疫组化染色:突触素的产物呈颗粒状。正常对照组、假手术组、AD模型组、2周移植组、4周移植组突触素平均光密度值分别为0.270士0.01、0.268士001、0.176士0.01、0.375士0.01、0.372士0.01。假手术组大鼠海马结构内突触素光密度值与对照组相比差异无统计学意义（尸>0.05）;AD模型组大鼠海一马结构内突触素光密度值明显低于对照组（尸<0.05）;2周移植组和4周移植组大鼠海马结构内突触素光密度值明显高于正常对照组、假手术组和AD模型组，差异有统计学意义（尸<0.05）。 7.行为学测试:正常对照组、假手术组、AD模型组、2周移植组、4周移植组学习获得尝试次数分别为34.83士18.60、43石7土14.82、98.17士4.49、40.00士15.53、42.83士9.56;记忆获得尝试次数分别为18.33士 10.25、16.50土6.47、77.17土19，59、21.50土13.16、21.67士7.17;学习获得正确反应率分别为62.99土2.48、61.90士3.95、53.92士1.43、58.81土2.87、60.73士4.91;记忆获得正确反应率分别为74.38士7.37、69.38士9.56、50.41士6.37、73.57土5.03、68.81士5.86。结果显示生理盐水注射对大鼠迷宫学习记忆无显著影响（尸>0.05）。A日l一40海马注射后学习能力和记忆能力均显著下降（尸<0.05），并且在整