青天葵黄酮类物质的研究

• 作 者: 王英丽
• 机 构: 西南医科大学
• 出 处: 泸州医学院 西南医科大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 青天葵 总黄酮 提取 纯化 含量测定 抗氧化 HPLC 药材鉴别

目的：以干燥青天葵大叶为研究对象,在前人的研究基础上,筛选青天葵总黄酮的提取和纯化方法,并进行含量测定；同时研究青天葵总黄酮的体外抗氧化活性,旨在为青天葵黄酮类化合物的进一步分离及单体的制备提供物质基础和科学依据；用HPLC法总黄酮图谱鉴别大、中、小叶3种青天葵叶子,比较液相色谱图来鉴别3种青天葵。通过分离提纯实验的研究,探索制备对照品方法,并得到了少量黄酮单体对照品。方法：在前期研究的基础上,首先探索最佳的提取方法从青天葵中提取总黄酮类物质；并对其黄酮类物质粗提物进行纯化,筛选最佳分离条件；根据理化鉴别检测其纯化物中具有黄酮类物质的理化特征,推断出青天葵纯化物是黄酮类。其次采用紫外-可见分光光度法对青天葵总黄酮进行含量测定。进而,采用邻二氮菲-Fe2+氧化法、邻苯三酚自氧化法、普鲁士兰法三种方法分别测定青天葵中总黄酮对羟自由基、超氧阴离子的清除能力及总还原能力。最后,用HPLC法总黄酮色谱图鉴别大、中、小叶3种青天葵叶子,比较液相色谱鉴别3种青天葵。通过各种分离提纯实验研究,探索制备对照品方法,得到了少量液相色谱图中前峰黄酮对照品。结果：青天葵总黄酮的最佳提取工艺是取青天葵碎叶按95%乙醇溶液渗漉法提取,溶剂重复循环使用、药材粒度为碎叶,浸泡时间24h,渗漉速度15ml·min-1,提取时间判断,渗漉至渗漉液无盐酸镁粉反应为止,最佳纯化艺是将提取物挥干后硅胶拌样 吸附,采用石油醚,乙酸乙酯热回流梯度提取。取乙酸乙酯部位浸膏上聚酰胺柱,洗脱剂先用水洗至无色,再用10%,30%,40%,50%,60%乙醇溶液,以3 BV/h速度洗脱,收集溶液,回收溶剂,减压干燥得50%洗脱部分即可。50%部分总黄酮含量测定为89.29%,青天葵药材中总黄酮含量为0.023%。并且,抗氧化实验结果表明,青天葵总黄酮具有清除羟自由基和超氧阴离子的能力及一定的总还原能力。HPLC 法总黄酮色谱图对照可以鉴别大中小叶3种青天葵叶子,容易区别,操作简便,重复性良好。制备液相法制备得少量黄酮单体。结论：通过对青天葵总黄酮提取和纯化工艺条件的筛选,得到了含量较高的青天葵总黄酮纯化物且其总黄酮纯化物具有体外抗氧化活性。另外,本实验组建立了区别青天葵大、中、小叶药材的简便方法,并制备得少量黄酮化合物单体。以上研究对青天葵的进一步研究提供了实验依据。