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键合型β—环糊精衍生物固定相的制备和应用是近年来色谱手性分离领域的一个研究热点。本论文致力于发展新型的β—环糊精衍生物固定相的制备,并在高效液相色谱(HPLC)中考查所制备的固定相对各类手性化合物的拆分能力。
首先,我们制备了一种结构明确的对氯苯基氨基甲酸酯化β—环糊精,并将其键合到氨基化硅胶表面得到了一种新型的手性固定相。采用湿法装柱技术,用甲醇作为顶替液,制备了对氯苯基氨基甲酸酯化β—环糊精手性柱。考查了对氯苯基氨基甲酸酯化β—环糊精手性柱的柱效和拆分能力,在流动相为正己烷/异丙醇=90/10(V/V),流速为0.5ml/min的条件下,其理论塔板数可以达到4.1×104/m。同样条件下,一种2—哌嗪二氢萘的衍生物(外消旋)在手性柱上的分离度可达1.49;考查了进样量和流速对柱效的影响,在保证信噪比(S/N)大于3的前提下,随着进样量的减小,柱效增高;在流速约为0.5ml/min时,柱效最高;考查了不同批次手性固定相之间的重现性,三批手性固定相中环糊精衍生物的键合量分别为14.09×10-2μmol/㎡、14.58×10-2μmol/㎡、14.44×10-2μmol/㎡,对2—哌嗪二氢萘的衍生物的分离度分别为1.23、1.31、1.49,表明不同批次手性固定相之间的重现性很好;通过对手性柱进行定期评价我们考查了手性固定相的稳定性,发现在将近一年的时间内柱效及其手性拆分能力基本没有什么改变,证明合成的手性固定相的稳定性较好。
本文还详细研究了在正相模式和反相模式下各种因素对手性拆分效果的影响,为建立和优化手性HPLC分析条件奠定了基础。在正相条件下,用异丙醇、乙醇、乙醚作为改性剂时,异丙醇的效果最好;随着流动相中异丙醇含量的增加或流动相流速的增大,对映异构体的保留因子和分离度都逐渐减小;进样量越小越有利于拆分;在反相条件下,用甲醇或乙腈作为有机改性剂时,发现甲醇的选择性比乙腈更好;随着流动相中甲醇含量的增加,对映异构体的保留因子和分离度都随之减小;流速和进样量对拆分效果的影响规律与正相模式下一致;在流动相中加入适量的缓冲液(pH值在3—7之间)有利于对映异构体与固定相之间的手性识别作用。
我们用对氯苯基氨基甲酸酯化β—环糊精手性柱对分子中不含苯环、含有一个苯环、含有两个苯环、含有多个苯环等一系列不同结构的手性化合物进行了拆分,均取得了较好的拆分效果,并根据拆分结果与手性化合物的结构推断了可能的拆分机理。
首次在对氯苯基氨基甲酸酯化β—环糊精手性固定相上拆分了钌苯金属手性配合物,并取得了较好的拆分效果。金属手性配合物的成功拆分进一步拓展了手性固定相的应用范围,为制备分离提供了条件。