【摘 要】
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背景：Cren7是新发现的保守的，非特异性泉古菌染色质蛋白。染色质蛋白在原核生物，古菌和真核生物中对基因组的包装和基因调控起着重要作用，但是对古菌染色质蛋白的了解仍然处于初
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背景：Cren7是新发现的保守的，非特异性泉古菌染色质蛋白。染色质蛋白在原核生物，古菌和真核生物中对基因组的包装和基因调控起着重要作用，但是对古菌染色质蛋白的了解仍然处于初级阶段。古菌的染色质结构并不统一，泉古菌作为古菌的一大分支，Cren7的发现及研究将极大丰富古菌的遗传学研究。X-射线晶体学在研究生物大分子的结构信息上的广泛应用，也使晶体学成为了解析Cren7结构与功能的重要手段。目的：Cren7作为新发现的泉古菌染色质蛋白，泉古菌基因组被Cren7压缩包装的机理仍未可知。本研究将Cren7与长链DNA和碱基错配DNA结合，并且选择Cren7中的两个关键位点分别进行点突变，再与合成的DNA片段结合，进行Cren7-DNA共结晶，筛选出适合衍射的晶体，收集X-射线衍射数据，为揭示泉古菌染色质的包装机理提供依据。方法：从芝田硫化叶菌（Sulfolobus shibatae）中克隆出Cren7的基因，经过诱导表达和蛋白纯化，分别与长链DNA片段和碱基错配DNA片段结合；又根据已有的Cren7与DNA复合物的晶体结构，将结合DNA的两个关键氨基酸（L28，R51）进行点突变（L28A、L28V、R51A、R51L、R51T及R51E），点突变Cren7分别与8bp DNA片段结合，将这些Cren7-DNA复合物结晶，经过大量初筛和优化，筛选出适合衍射的晶体。结果：成功得到了高分辨率的Cren7与长链DNA复合物的晶体结构，Cren7与碱基错配DNA复合物的晶体结构，以及除Cren7(R51A)-DNA复合物外的5个突变型Cren7与DNA复合物的晶体结构，收集这些晶体的X-射线衍射数据，根据这些数据进行数据解析将会进一步揭示泉古菌基因组被Cren7压缩包装的机理。
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