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目的:研究ezrin和merlin蛋白及其磷酸化状态在人胰腺癌组织细胞中的表达情况,分析其与临床病理特征、预后之间的关系:同时观察对胰腺癌细胞SW1990稳定转染了磷酸化ezrin和merlin基因后,胰腺癌细胞SW1990生物学行为的变化。
方法:应用免疫组化的方法对我院病理科保存收集的19例胰腺癌及癌旁组织中的ezrin、nerlin及磷酸化蛋白进行检测,并观察这几种蛋白在正常胰腺组织、胰腺癌细胞质及细胞膜的表达情况,以及与临床病理因素之间的关系;脂质体转染pcDNA3.1+HA、pcDNA3.1+HA-p-ezrinThr567和pcDNA3.1+HA-p-merlinSer518人胰腺癌细胞株SW1990中,建立稳定表达的细胞系SW1990-p-ezrin和SW1990-p-merlin,应刚MTT实验、流式细胞学技术、Transwell迁移实验和细胞一基质粘附及侵袭实验来观察转染基冈对细胞生长增殖能力、细胞周期及凋亡、细胞迁移和粘附、侵袋能力的影响。
结果:蛋白(ezrin567/ezrin353、merlin518)及其磷酸化(p-ezrin Thr567/p-ezrinTyr353、p-merlin Ser518)在正常胰腺组织及胰腺癌组织的咆浆中均见不同程度的表达,之间并无显著性差异。ezrinThr567、p-ezrin Thr567、ezrin Tyr353、p-ezrin Tyr353这四种蛋白在胰腺癌细胞膜上阳性表达分别为94.7％(p＜0.05)、63.2%(p＜0.05)、94.7%(p＜0.05)、73.7%(P＜0.05),而正常胰腺组织细胞膜上很少表达。差别有统计学意义。merlin Ser518、p-merlin Ser518蛋白在胰腺癌细胞膜上的表达与正常胰腺组织细胞膜上相似,都较少。人胰腺癌组织中p-ezrin-567/p-ezrin-353在细胞质中的表达率随胰腺癌肿瘤TNM分期的提高而升高,差异有统计学意义(p＜0.05)。且胰腺癌细胞质中p-ezrin一567/p-ezrin353阳性表达组与阴性表达组术后生存时间存在差异,具有统计学意义(p＜0.05)。成功建立稳定表达的细胞系SW1990-p-ezrin和SW1990-p-merlin,MTT显示p-ezrin蛋白促进了胰腺癌细胞SW1990的增殖生长(P＜0.05),而p-merlin蛋白则抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖生长(P＜0.05)。流式细胞仪分析显示SW1990-p-ezrin组细胞G1期细胞比例明显减少(P＜0.05),S期比例增加(P＜0.05),G2期比例增加(P＜0.05),显示出p-ezrin567转染后促进了SW1990增殖;而SW1990-p-merlin组细胞G1期细胞比例明显增加(P＜0.05),S期比例增减少(P＜0.05),G2期比例增减少(P＜0.05),显示山p-merlin518转染后对SW1990有生长有抑制作用。SW1990-p-ezrin细胞与基质的黏附能力有上升(P＜0.05),迁移及侵袋能力也有提高(P＜0.05);SW1990-p-merlin组细胞与基质的黏附能力及迁移侵袋能力未见明显变化。
结论:1.ezrin蛋白及其磷酸化状态在胰腺癌细胞膜上存在明显表达,而在正常胰腺组织的细胞膜上未见表达。但merlin蛋白及其磷酸化状态在胰腺癌细胞膜上未见明显表达;2.ezrin的磷酸化与胰腺癌不良生物学行为之间存在着密切关系。3.p-ezrin对人胰腺癌细胞SW1990的生长、粘附及迁移、侵袋发挥止向凋节作用,而p-merlin基因对胰腺癌细胞SW1990的生长发挥负向凋节作用。