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目的:本课题小组前期实验研究发现,胆脂瘤组织中CD133和NF-κB蛋白均高表达,且利用流式细胞仪分析得到,Rhek-p65细胞系(过表达NF-κB的人皮肤角质细胞)中CD133+细胞率提高,二者表达呈正相关关系,提示NF-κB对CD133具有调控作用,CD133可能是NF-κB的潜在靶基因,但不能确定二者直接相关。为了研究NF-κB与CD133之间靶标关系,本实验构建克隆有CD133启动子基因片段的双荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因检测系统验证二者关系,为进一步探讨NF-κB和CD133基因在胆脂瘤发生、发展过程中可能机制提供实验基础。方法:先在NCBI上找到CD133 promoter区域,然后使用JASPAR database网站找到CD133启动子上可能与NF-κB结合的基因序列,并使用PCR的方法扩增得到包含与NF-κB结合的CD133基因启动子序列。将扩增得到的CD133基因启动子序列连接到p GL3荧光素酶报告质粒中,构建CD133基因启动子的荧光素酶报告质粒(CD133 promoter-p GL3),测序正确后,将CD133promoter-p GL3、pc DNA-NF-κB、p GL3-control、空载pc DNA3.0、p RL-TK按分组情况分别转染293ft细胞,48~72h后使用超微量紫外分光光度计检测各组荧光素酶的活性。结果:酶切证实成功扩增了113bp大小的CD133启动子基因片段;测序结果证实构建了含有113bp大小的CD133启动子基因片段的荧光素酶报告质粒;使用高灵敏度板式化学发光检测仪检测到共转CD133 promoter-p GL3和pc DNA-NF-κB的293ft细胞的相对荧光素酶活性是46.62±4.62,共转CD133promoter-p GL3和空载pc DNA3.0(NF-κB的阴性对照质粒)的荧光素酶活性是44.74±7.85。两组间进行比较得到P>0.05。结论:CD133启动子双荧光素酶报告质粒构建成功,双荧光素酶报告系统证实NF-κB没有直接调控本实验扩增得到的CD133启动子基因序列。