电极法检测牛奶中过氧化氢和β-内酰胺抗生素的研究

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本研究采用直接电极法和辣根过氧化物酶电极法检测牛奶中过氧化氢,采用β-内酰胺酶电极法检测牛奶中β-内酰胺抗生素。优化了直接电极法检测牛奶中过氧化氢的工作条件;改进了辣根过氧化物酶电极和β-内酰胺酶电极的制备方法,并对两种酶电极的电化学性能分别进行表征,初步建立了一种针对牛奶中过氧化氢和β-内酰胺抗生素的定量检测方法。优化了生鲜牛乳中过氧化氢直接电极检测的工作条件,研究了样品处理方法对检测结果的影响,重点比较了在0~10mg/L (n=8)和10~80mg/L (n=6)浓度范围内直接电极法与过氧化氢试纸条法和淀粉—碘化钾法的检出率及误判率,旨在验证用于生鲜牛乳中过氧化氢检测的直接电极法的可靠性。结果表明在0~10mg/L和10~80mg/L范围内直接电极法的检出率为分别为100%和93.33%,误判率为分别为7.14%和7.89%。过氧化氢试纸条法和淀粉—碘化钾法的检出率分别为0%和83.33%,误判率分别为100%和20%。以新亚甲蓝作为电子媒介体,选用壳聚糖为固定基质固定辣根过氧化物酶于丝网印刷电极表面,成功地制备了辣根过氧化物酶电极,并应用于磷酸缓冲溶液和牛奶样品中过氧化氢的检测。采用循环伏安法研究了溶液中新亚甲蓝的电化学性质和辣根过氧化物酶电极的电化学性质,探讨了壳聚糖浓度和温度对酶电极性能的影响,重点讨论了在磷酸缓冲溶液和牛奶中辣根过氧化物酶电极与过氧化氢的响应关系。结果表明当电位在0~-0.4V时,辣根过氧化物酶电极在磷酸缓冲溶液和牛奶中的还原电流与过氧化氢浓度均成正相关,回归方程分别为I=0.01038C+1.9987和I=0.01868C+1.42064(C为过氧化氢的浓度,mg/L),线性范围为0~60mg/L,r值分别为0.9971和0.9955。以新亚甲蓝作为氧化还原探针,将青霉素水解反应转化为可检测的电流信号,制备了β-内酰胺酶电极,并用于磷酸缓冲溶液和牛奶样品中青霉素的检测。采用循环伏安法探讨了壳聚糖浓度、磷酸缓冲液pH值和浓度、酶浓度及电极表面酶固定量等因素对β-内酰胺酶电极电化学性能的影响,重点讨论了β-内酰胺酶电极在在磷酸缓冲溶液和牛奶中与青霉素的响应关系。结果表明当电位在0~-0.4V时,β-内酰胺酶电极的还原电流与青霉素的浓度成正相关,在磷酸缓冲溶液中线性范围为0.1~1.0μg/mL (r=0.9957),在牛奶中线性范围为0.2~10μg/mL (r=0.9943).
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