根皮素抑菌活性及抑菌机理的研究

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目前关于根皮素抑菌活性的研究已有报道,研究显示根皮素对多种革兰氏阳性菌和阴性菌包括金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌等,植物病原真菌包括辣椒疫霉菌、黑斑病菌、稻瘟病菌等均有抑制其生长的活性。但根皮素的抑菌机理尚不明确。本文以单增李斯特菌(CMCC54004)为供试菌,从细胞膜结构完整性,能量水平,关键代谢酶活性,细胞内可溶性蛋白浓度和细胞内核酸形态等方面系统研究了根皮素抑菌的作用机制,为根皮素发展成为新型抗菌药或者天然无毒的防腐剂提供理论基础。本研究主要得出以下结果:(1)根皮素具有较强的抑制单增李斯特菌生长的活性,抑制效果随其浓度的升高而增强。100-200 μg/mL的根皮素溶液能完全抑制单增李斯特菌的生长长达48h,且具有一定的杀菌效果。(2)通过扫描电镜,透射电镜,钾离子浓度和细胞内大分子物质(核酸和蛋白质)外泄测定结果显示,根皮素增大了单增李斯特菌细胞膜的通透性,但胞内大分子物质没有外泄,说明根皮素对单增李斯特菌细胞膜只造成了微小损伤,并未改变细胞膜及细胞壁的完整性。(3)根皮素影响了细胞的能量合成,降低了能量代谢途径关键酶的总活性,但对其比活力影响不明显。与对照组相比,25μg/mL,50 μg/mL,100μg/mL,200μg/mL根皮素处理组的总ATP含量分别减少了21.92%,28.45%,40.69%,74.80%,说明根皮素影响了细胞的能量合成。EMP途径上己糖激酶和TCA途径上异柠檬酸脱氢酶酶比活力的测定结果显示根皮素引起能量代谢途径上关键酶比活力的降低不明显。(4)根皮素引起了细胞内DNA的聚集,导致蛋白合成减少。透射电镜下胞内物质固缩出现空腔表明根皮素引起了细胞内部超微结构的变化。DNA体外作用实验结果说明根皮素不能使DNA裂解,推测根皮素作用后细胞内的空腔是由于根皮素引起了胞内DNA的聚集。考马斯亮蓝染色法和蛋白谱带分析实验表明加入根皮素后菌体内可溶性蛋白的含量明显下降,200 μg/mL根皮素处理组与对照组相比减少了83.75%。由以上结果可知,根皮素对单增李斯特菌有较强的抑菌活性,其抑菌机理可能是引起细胞内DNA的聚集,进而导致细胞内蛋白质和能量合成减少,造成细胞内代谢紊乱。
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