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目的:本文研究肿瘤细胞损伤释放物(molecules from damaged tumor cells, DTC-Ms)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的侵袭迁移能力的影响,以探讨Toll-like受体4(TLR4)信号通路影响乳腺癌细胞侵袭迁移的可能机制。 方法:(1)体外分别用DTC-Ms和LPS刺激MDA-MB-231和MCF-7细胞,48小时后 transwell方法检测细胞的侵袭迁移能力。(2)在体外,将MDA-MB-231和MCF-7细胞都分成3组:一组为阴性对照,另两组分别用DTC-Ms和LPS刺激,24小时后用real-time RT-PCR的方法检测maspin、TPM1和KAI1的基因表达水平;48小时后用Western blot的方法检测maspin、TPM1和KAI1的蛋白表达水平。(3)将MDA-MB-231细胞分为5组:一组为阴性对照,另两组分别用LPS和DTC-Ms刺激,最后两组提前1h用QNZ阻断NF-κB后再分别加入刺激因子LPS和DTC-Ms,48小时后Western blot检测maspin和TPM1。(4)体外分别用DTC-Ms和LPS刺激MDA-MB-231和MCF-7细胞,24小时后 real-time RT-PCR检测 miR-21。(5)将MDA-MB-231和MCF-7细胞分为5组:一组为阴性对照,另两组分别用LPS和DTC-Ms刺激,最后两组提前1h用QNZ阻断 NF-κB后再加入刺激因子LPS和DTC-Ms,24小时后real-time RT-PCR检测miR-21。(6)将MDA-MB-231细胞分为5组:一组为阴性对照,另两组分别用LPS和DTC-Ms刺激,最后两组提前1h用QNZ阻断 NF-κB后再加入刺激因子 LPS和DTC-Ms,48小时后transwell方法检测细胞的侵袭迁移能力。 结果:(1)用DTC-Ms、LPS分别刺激 MDA-MB-231和MCF-7细胞后, MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力变的更强,MCF-7细胞的侵袭迁移能力没有变化。(2)未刺激的MDA-MB-231和MCF-7细胞都表达maspin、TPM1和KAI1,并且这两株细胞表达的KAI1在mRNA水平和蛋白水平都基本没有差异;未刺激的与刺激的MDA-MB-231细胞转录的maspin、TPM1均明显低于 MCF-7细胞, DTC-Ms、LPS刺激的MDA-MB-231细胞所表达的的maspin和TPM1蛋白明显下调。(3)用QNZ阻断MDA-MB-231细胞的NF-κB信号途径后, LPS和DTC-Ms刺激后maspin和TPM1的蛋白水平无显著变化。(4)用DTC-Ms、LPS激活MDA-MB-231和MCF-7细胞的TLR4信号通路均能使miR-21表达上调。(5)用QNZ阻断MDA-MB-231和MCF-7细胞 NF-κB信号途径后,LPS和DTC-Ms刺激不能上调 miR-21表达。(6)用QNZ阻断 MDA-MB-231细胞 NF-κB信号途径后,LPS和DTC-Ms刺激不能加强其转移能力。 结论:DTC-Ms和LPS可通过激活 MDA-MB-231的TLR4信号通路,进一步激活NF-κB而上调miR-21的表达,进而抑制maspin和TPM1的表达,从而增强MDA-MB-231的侵袭迁移能力;而MCF-7受到同样的刺激后,虽然也能激活 NF-κB而上调 miR-21的表达,但是却不能有效地下调 maspin和TPM1的表达,这可能是MCF-7迁移能力不受刺激物影响的原因。