溶藻胶弧菌rpoS基因突变菌株的构建及其特性研究

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溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种条件致病菌,它能感染人类和海洋动物。自然界中的细菌能够适应各种各样的不利环境,并且能在一定条件下进入活的非可培养(VBNC)状态。rpoS基因编码RpoS因子,是细菌稳定期一个调控因子,当细菌进入稳定期时,RpoS因子能够增强细胞对外界不良环境的抗逆性和适应能力。本论文目的是研究RpoS因子在溶藻胶弧菌处于恶劣环境中或诱导其进入VBNC状态过程中的作用。首先克隆了溶藻胶弧菌VIB283的rpoS基因,利用同源重组构建了该菌rpoS基因的突变菌株。通过对突变菌株和野生菌株的比较发现,在正常条件下培养,野生株和突变株都能很好的在2216E液体培养基中生长,但突变株的最终细菌浓度是野生株浓度的1/2。突变菌株对过氧化氢的应答敏感,两菌的存活率差异显著,而在高渗透压条件下,两株菌的存活率没有明显差异。将细菌寡营养条件下培养12天后,野生菌株的活菌数为原来的53.50%,突变株为原来的1.96%,两菌差异显著。在4℃寡营养条件下培养野生菌株在69天进入VBNC状态,而突变株则在37天即可进入。将野生菌株和突变菌株注射斑马鱼,检测其致病性的变化,注射的斑马鱼都有不同程度的死亡,野生菌株和突变菌株半数致死量(LD50)相似,分别是5.78×107 CFU/mL和2.05×107 CFU/mL,rpoS基因突变对溶藻胶弧菌致病性没有明显影响。
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