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【目的】宫颈癌(cervical cancer,CC)是影响全球女性的第四大常见癌症,发病率和死亡率极高。肿瘤坏死因子α(TNF-α)是参与许多炎症病理的细胞因子,TNF受体的激活导致细胞内衔接蛋白的募集,激活多种信号转导途径,现已有大量证据表明TNF-α参与人类癌症的发生和进展。长非编码RNA(lnc RNA)在表观遗传,转录和转录后水平调节基因表达,并参与癌症的发生发展。为了探讨炎症因子对lnc RNAs和CC恶性行为的影响及机制。我们根据深度测序的结果筛选了一组在TNF-α刺激下的He La细胞中差异表达的lnc RNAs,最后选择了由TNF-α刺激后表达明显上调的lnc RNALOC105374902。本研究拟解析LOC105374902在TNF-α刺激下差异性表达的原因以及对CC细胞恶性行为的影响和作用机制,从而明确其在CC发生发展中的作用,为阐明CC的发病机制及诊断治疗提供新依据。【方法】首先,运用RT-q PCR方法检测了16个差异性表达比较明显的lnc RNAs在TNF-α处理组和对照组中的表达情况。接着Northern blot实验验证了LOC105374902的存在和大小,RNA核浆分离和RT-q PCR检测了其定位。然后为了探究TNF-α对LOC105374902影响的机制,预测LOC105374902启动子上的转录因子的结合位点,通过双荧光素酶报告系统和RT-q PCR解释了TNF-α诱导LOC105374902差异性表达的机制。然后应用transwell迁移和侵袭实验、MTT、集落形成实验和Western blot实验检测了LOC105374902对宫颈癌恶性行为及EMT进程的影响。为了解析LOC105374902的具体作用机制,我们首先利用reg RNA软件选择了四个其可能结合的靶mi RNA,设计构建了带有mi R-1285-3p结合位点的lnc RNA野生型和突变型的EGFP质粒,Western blot实验验证了mi R-1285-3p和LOC105374902之间的靶向关系。然后通过RT-q PCR和Western blot实验检测LOC105374902对mi R-1285-3p表达的影响。接着利用细胞功能学实验及Western blot实验验证了mi R-1285-3p对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力及EMT过程的作用。之后通过生物学信息方法预测了mi R-1285-3p的候选靶m RNA,并运用RT-q PCR、Western blot实验证实了mi R-1285-3p以及LOC105374902对RPL14 m RNA和蛋白水平表达的影响。同时transwell迁移和侵袭实验、Western blot实验检测了RPL14对宫颈癌恶性行为及EMT进程的影响。最后应用RT-q PCR、Western blot实验及细胞功能学的挽救实验证实mi R-1285-3p是否介导了LOC105374902对宫颈癌细胞的功能学作用。【结果】RT-q PCR实验结果显示lnc RNA LOC105374902在TNF-α处理下表达明显上调,这与深度测序的结果相一致。另外Northern blot的结果显示LOC105374902确实存在且大小为812nt,核浆分离的结果显示其在细胞质和细胞核中都有分布,细胞核中较多。双荧光素酶报告系统和RT-q PCR的结果表明TNF-α是通过促进STAT3结合到LOC105374902的启动子上从而促进lnc RNA的表达水平的。Transwell迁移和侵袭实验及EMT的结果显示LOC105374902促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力及EMT进程,但对细胞活力和增殖的影响不明显,表明其在宫颈癌中发挥着致癌基因的作用。Western blot实验的验靶结果表明LOC105374902与mi R-1285-3p之间存在直接靶向的关系且二者能在m RNA和蛋白水平上负向调控彼此的表达。细胞学功能实验表明mi R-1285-3p在宫颈癌中发挥着抑癌基因的作用,这与二者的靶向关系验证的结果相一致。同时我们的验靶结果和RT-q PCR显示了mi R-1285-3p对RPL14的负向调控,另外RT-q PCR和Western blot结果显示了LOC105374902对RPL14表达水平的促进作用。并且transwell迁移和侵袭实验、Western blot实验显示RPL14促进宫颈癌细胞的恶性行为和EMT进程。最后的挽救实验的结果表明mi R-1285-3p可以介导LOC105374902在宫颈癌细胞中的生物学功能。【结论】本研究发现TNF-α通过STAT3上调LOC105374902的表达水平,并且LOC105374902促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。其作为mi R-1285-3p的竞争性内源RNA从而促进下游靶基因RPL14的表达水平和在宫颈癌细胞中的恶性行为。