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肿瘤多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时,对结构和作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性,是许多癌症化疗失败的主要原因。因此,寻找肿瘤多药耐药逆转剂,阐明其作用机制,提高化疗效果,成为该领域研究热点。2’,4’-Dihydroxy-6’-methoxy-3’,5’-dimethylchalcone (DMC),是一种从桃金娘科植物水翁[Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. et Perry]的花蕾中分离得到的查耳酮类化合物。本论文重点研究了DMC对肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的体内、外逆转效果及作用机制。体外细胞水平研究发现,DMC能增强耐药细胞株BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的敏感性,逆转其耐药性,与未加DMC相比,最大逆转倍数分别为4.7倍和2.3倍。荧光染色Hoechst 33258和流式细胞检测显示,DMC可以增加细胞的凋亡,凋亡率最大可达53.36±1.98%。HPLC分析显示,DMC处理后的BEL-7402/5-FU细胞,其胞内5-FU的含量明显增加,8μM DMC作用后,胞内5-FU含量为未加DMC组的2.13倍。RT-PCR检测显示,DMC作用后,可下调多药耐药相关基因MRP1和GST-π基因的转录,8μM处理BEL-7402/5-FU细胞后,MRP1和GST-π的转录水平降到对照组的54%和58%。Western-blot结果表明,DMC作用下可以降低MRP1蛋白的表达,从而达到逆转效果。利用裸鼠异种移植瘤模型,对DMC在体内对BEL-7402/5-FU的MDR逆转效果进行了研究,结果表明,5-FU (20mg/kg)和DMC (40mg/kg)联合用药,与5-FU (20mg/kg)单独用药相比,肿瘤抑制率为72.2%。20mg/kg和40mg/kgDMC与5-FU分别联合作用后,与无DMC作用的对照组比较,肿瘤组织内5-FU的含量分别为对照组的1.58倍和1.8倍。同时,荧光酶标法检测显示,DMC增加了凋亡蛋白酶Caspase-3蛋白的活性,与无DMC作用的对照组相比,联合作用组其酶活率最大为对照组的289%。此外,TUNEL检测显示,与5-FU单独用药相比,联合治疗可以增加肿瘤的凋亡,凋亡率最大可达62.09±7.31%。H.E染色显示,联合治疗能增加肿瘤组织坏死效果。研究结果显示,DMC能在体内外有效地逆转BEL-7402/5-FU细胞对5-FU的耐药性,机制包括增加凋亡、Caspase-3蛋白酶活性,增加胞内抗癌药物含量,以及下调多药耐药基因、蛋白等。