【摘 要】
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通过同源双交换,构建了染色体上的lacF基因内部有部分缺失的食品级受体菌WZ103.含lacF基因的互补质粒pMG36eF能使WZ103的Lac表型得到恢复,表明pMG36eF上的lacF基因的表达能互
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通过同源双交换,构建了染色体上的lacF基因内部有部分缺失的食品级受体菌WZ103.含lacF基因的互补质粒pMG36eF能使WZ103的Lac<+>表型得到恢复,表明pMG36eF上的lacF基因的表达能互补WZ103中lacF基因缺陷.酶切去除pMG36eF上的红霉素抗性基因(erm),构建了以lacF基因为唯一选择标记的食品级载体pWZ101.在食品级载体pWZ102上,乳糖诱导启动子P<,lacA>被用于控制异源基因的表达.分别构建了人谷胱甘肽硫转移酶A1(hGSTA1)和人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)的表达受启动子P<,lacA>控制的食品级表达载体pWZ103和pWZ104.它们在WZ103中能分别表达的hGSTA1或Cu/Zn SOD,并且表达的Cu/Zn SOD具有生物活性.以整合型载体pORI19(1)为辅助质粒时,共电转化法也可用于食品级载体的构建.新的葡激酶基因亚型sakXH基因被克隆并在大肠杆菌中得到了高效诱导表达,表达产物有特异的纤溶活性.表达质粒pAH和pPAH上,sakXH基因的表达分别受单一启动子P<,lacA>或由双启动子P<,32>-P<,lacA>的控制.电转化导入乳酸乳球菌MG5267后,通过Western杂交及纤溶平板法检测并比较sakXH基因的表达水平,结果表明,双启动子P<,32>-P<,lacA>比单启动子P<,lacA>更强,并且与P<,32>融合后P<,lacA>仍可被乳糖诱导.因此,利用两个线性排列的双启动子能有效地提高了乳酸乳球菌表达系统的表达水平.克隆了霍乱毒素B亚单位基因(ctxB)并在大肠杆菌BL21DE3(pLysS)获得了IPTG诱导的高效表达,且表达产物理学包涵体形式.
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