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研究背景:胃癌作为人类最常见的消化道恶性肿瘤之一,在我国呈现低早期诊断率,高死亡率的特点。化疗则是中晚期胃癌和胃癌术后的主要治疗手段之一,但是肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生严重影响化疗疗效。肿瘤的多药耐药是很多因素共同作用的结果,其作用机制复杂,至今尚未明确。深入研究胃癌的多药耐药产生机制,实现耐药性的逆转,将会给胃癌的临床治疗带来新的突破。生存素(survivin)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在诸多肿瘤中都具有高表达特性,但在胃癌耐阿霉素细胞株SGC7901/ADR中未见明确研究。本课题组研究发现Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin(β连环蛋白)在胃癌耐阿霉素药细胞株SGC7901/ADR中表达明显高于SGC7901细胞株,β-catenin可能参与胃癌MDR的过程。在S100A6基因下调的SGC7901质粒稳转细胞株中发现β-catenin也呈现低表达,β-catenin和S100A6两者存在正相关性,均与耐药有关。Survivin和cyclinD1均作为Wnt/β-catenin下游具有争议的因子,在肿瘤多药耐药中的作用尚不明确,在胃癌及其耐阿霉素细胞中尚未有报导。本研究采用Western Blotting(蛋白免疫印迹)、ICC(免疫细胞化学)、RT-PCR和CCK8(细胞增殖与活性检测)实验技术来检测survivin和cyclinD1在人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/ADR和本课题组之前所构建的S100A6下调SCG7901细胞所导致β-catenin呈低表达的shRNA-1、shRNA-3质粒稳转细胞株的表达情况,探讨Wnt/β-catenin、survivin和cyclinD1三者之间是否存在关系,与胃癌耐药之间所存在的关系。为Wnt/β-catenin通路作为临床治疗以及克服胃癌的多药耐药提供相关理论依据。目的:探讨survivin、cyclind1与sgc7901/adr细胞株中的多药耐药的关系,并进一步探讨survivin、cyclind1与wnt/β-catenin参与胃癌mdr的过程。方法:1、免疫细胞化学技术(icc)、westernblotting(wb)技术和rt-pcr技术检测survivin、cyclind1在人胃癌sgc7901细胞及其耐阿霉素细胞sgc7901/adr中的差异;2、icc技术、wb技术和rt-pcr技术检测survivin、cyclind1分别在sgc7901细胞中s100a6下调导致β-catenin低表达的shrna-1、shrna-3质粒稳转细胞中的表达差异。3、cck-8细胞毒性实验检测上述五种细胞的半抑制浓度(ic50)和耐药指数(ri)。结果:1、survivin结果显示:(1)icc:survivin在sgc7901细胞浆深染成棕褐色,染色呈强阳性(+++);sgc7901/adr细胞浆和部分细胞核深染成棕褐色,染色呈强阳性(+++);sgc7901、nc质粒稳转细胞为棕褐色,染色呈强阳性(+++),β-catenin低表达的shrna-1、shrna-3质粒稳转细胞胞浆染色呈棕黄色,染色呈阳性(++)。(2)westernblotting显示survivin蛋白在sgc7901/adr细胞中平均表达量明显高于sgc7901细胞,差异性显著,p值<0.05;sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞,差异性显著,p值<0.05。(3)rt-pcr结果显示:survivin在sgc7901/adr细胞中的平均表达量高于sgc7901细胞,差异性显著,p值<0.05。survivin在sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p值<0.05,有显著性差异。2、cyclind1结果显示(1)icc:cyclind1在sgc7901部分细胞核深染成棕黄色,染色呈阳性(++),sgc7901/adr细胞核深染成棕褐色,染色呈强阳性(+++);sgc7901和nc质粒稳转细胞胞浆染色呈棕黄色,染色呈阳性(++);β-catenin低表达的shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞胞浆无染色,染色呈阴性(—)。(2)westernblotting:cyclind1显示sgc7901/adr细胞中的平均表达量明显高于sgc7901细胞,差异性显著(p<0.05);sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p<0.05,差异性显著。(3)rt-pcr结果显示:cyclind1在sgc7901/adr高于sgc7901细胞差异性显著(p<0.05);sgc7901细胞中mrna平均表达量明显高于s100a6下调至β-catenin低表达的shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p值<0.05,具有显著差异。结论:1、Survivin和cyclinD1参与人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR耐药,survivin、cyclinD1高表达,细胞的耐药性增加。2、2、Survivin和cyclinD1位于Wnt/β-catenin信号通路下游,参与胃癌的多药耐药。3、3、β-catenin高表达,survivin和cyclinD1表达均增高;β-catenin低表达,survivin和cyclinD1表达均降低,β-catenin和survivin、β-catenin和cyclinD1表达存在一致性。