铁棒锤化学成分的HSCCC制备分离及抗氧化活性研究

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铁棒锤来源于毛茛科乌头属植物铁棒锤Aconitum pendulum Busch和伏毛铁棒锤Aconitum flavum Hand.-Mazz.的干燥块根和幼苗,现代研究表明铁棒锤具有解热、消炎、镇痛、局麻和抑菌作用,在西北地区民间广泛应用于治疗跌打肿痛、风湿关节痛、外伤出血等症状,发挥了良好的治疗作用。铁棒锤根和根茎中含生物碱类和黄酮类活性成分,具有很高的药用价值。本文主要进行了铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)化学成分的高速逆流色谱(HSCCC)分离制备、提取工艺优化及HPLC-DPPH抗氧化活性研究。  本研究主要内容包括:⑴在单因素实验的基础上,选择液料比、提取温度、提取时间3个因素为自变量,以铁棒锤根中一种咪唑生物碱(ICABE)的提取率作为响应值,采用3因素3水平的响应面分析法,优化了铁棒锤乙醇超声提取工艺:液料比23.0 mL/g,提取温度为58℃,提取时间为51min。⑵采用HSCCC技术从铁棒锤根的氯仿萃取部分分离得到1个化合物,经1H-NMR、13C-NMR等波谱学数据分析鉴定为一种咪唑生物碱1H-Imidazole-2-carboxylic acid, butyl ester(ICABE)。⑶采用大孔树脂粗分结合HPLC-DPPH方法快速筛选铁棒锤地上部分的抗氧化活性部位及成分。结果表明:大孔树脂水、10%乙醇、30%乙醇和50%乙醇四个洗脱部位中,30%乙醇部位对DPPH·的抑制率最高,其中化合物(4)抗氧化性显著。此方法省时省力、操作简单易控、响应快速准确,具有良好的重现性。⑷采用大孔树脂富集、HSCCC分离制备结合半制备色谱(semi-prep-HPLC)从铁棒锤地上部分粗提物大孔树腊预处理30%乙醇洗脱部分中分离纯化了8种单体化合物,经1H-NMR和13C-NMR等波谱学数据分析鉴定为:木兰花碱(1)、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(2)、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-(6-反式咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(4)、山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-(6’-反式咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(5)、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-(6-反式对香豆酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(6)、山奈酚7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-(6’-反式对香豆酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(7)、山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖基-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷(8),羟基酪醇-1-O-(6-反式阿魏酰基-(4”→1)-β-D-葡萄糖基)-β-D-葡萄糖苷(9)。经HPLC检测纯度分别为97.2%(1)、95.7%(2)、96.4%(4)、97.2%(5)、98.6%(6)、96.8%(7)、98.8%(8)和93.9%(9)。该方法简便、快速,所得产物纯度高,适合于铁棒锤地上部分化学成分的制备分离。⑸通过DPPH·分光光度计法测定了铁棒锤地上部分分离得到的黄酮苷类化合物2、4、5、6、7和8的清除自由基能力。结果表明:化合物4和5清除DPPH自由基能力较强,其IC50值为16.92μg/mL和27.23μg/mL。
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