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第一部分: 目的: 通过检测RANK信号通路分子在衰老卵巢的表达情况,为进一步揭示RANK信号通路与卵巢衰老的相关性奠定基础。 方法: 1、HE染色检测:收集8周和12个月的ICR小鼠卵巢,进行冰冻切片、HE染色检测小鼠卵巢中原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡的数目。 2、RT-PCR检测:收集8周和12个月的ICR小鼠卵巢,分别提取卵巢总RNA,RT-PCR检测RANK信号通路相关分子RANK、RANKL和AIRE在卵巢中的表达情况。 结果: 1、卵泡统计结果显示:8周的小鼠卵巢内原始卵泡数目为66±17个,初级卵泡数目为50±7个,次级卵泡数目为36±13个,成熟卵泡数目为6±2个;12个月的小鼠卵巢内原始卵泡数目为13±3个,初级卵泡数目为2±1个,次级卵泡数目为2±1个,成熟卵泡数目为0±0个。 2、RT-PCR结果显示:8周的小鼠卵巢表达RANK信号通路相关分子RANK、RANKL和AIRE;而12个月的小鼠卵巢不表达RANK信号通路相关分子RANK、RANKL和AIRE。 结论: 衰老卵巢中各级卵泡数目明显减少;衰老卵巢不表达 RANK信号通路相关分子RANK、RANKL和AIRE。 第二部分: 目的: 利用慢病毒将基因特异性shRNA慢病毒质粒导入小鼠2-细胞期胚胎,为建立基因knockdown小鼠模型奠定基础。 方法: 1、体外培养:收集小鼠2-细胞期胚胎,分为两组:一组直接培养,一组去除胚胎透明带后培养。观察小鼠2-细胞期胚胎和去透明带的小鼠2-细胞期胚胎体外发育情况。 2、慢病毒感染:收集小鼠2-细胞期胚胎,去除胚胎透明带。通过慢病毒感染的方式将基因特异性shRNA慢病毒质粒导入小鼠2-细胞期胚胎。 结果: 1、小鼠2-细胞期胚胎经体外培养发育至囊胚阶段。 2、去透明带的小鼠2-细胞期胚胎经体外培养发育至囊胚阶段。 3、加入慢病毒后的小鼠2-细胞期胚胎经体外培养发育至囊胚阶段,基因特异性shRNA慢病毒质粒未成功导入胚胎。 结论: 去透明带处理和慢病毒感染均不影响小鼠2-细胞期胚胎体外培养至囊胚阶段。