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本研究通过对四川攀西地区野生香菇资源进行调查,了解了该地区野生香菇发生季节和规律,并收集了野生香菇菌株进行保藏。以四川攀西地区13个县的共32个野生香菇菌株进行遗传分析和菌丝生理特性测定,以8个四川常用的栽培香菇菌株为对照。结果表明:
1.四川攀西地区野生香菇资源丰富,调查、采集和分离培养该地区野生资源,填补了国内外对攀西野生香菇资源研究的空白。在攀西地区的西昌市、冕宁、德昌、喜德、盐边、木里、盐源、攀枝花市西区、普格、宁南、会东、会理、米易县等13个县区均有野生香菇分布。主要发生在5月初到6月底,海拔2000米左右的湿地森林内。
2.ITS区域在种内十分保守,香菇不同种的ITS长度存在差异,ITS可以有效区别种之间的菌株。利用一对ITS通用引物(ITS4-ITS5),通过PCR扩增,得到750bp左右的DNA扩增条带,表明两者的DNA同源性为100%,从而成功鉴定出试验菌株全部为香菇种菌株,而且该技术快速准确,费用低,工作量小。经出菇验证,并与对照菌株进行比较,发现供试野生香菇菌株从形态上与对照菌株无差别,进一步表明所收集的野生菌株全部为香菇种。
3.采用简单序列重复区间扩增多态性(Inter-simplesequencerepeat,ISSR)技术,利用10个引物对32个四川野生香菇菌株和8个香菇栽培品种进行了遗传多样性分析,构建了遗传相关聚类图。ISSR标记分析结果表明,栽培香菇和野生香菇处于不同的ISSR聚类组中,栽培菌株之间亲缘关系较近,但野生香菇菌株亲缘关系差异显著。野生香菇菌株遗传多样性丰富,从而为改良现有栽培香菇菌株,提高产量和质量提供科学的依据。
4.在本研究中发现,相同的菌株在PDA和木屑培养基中菌丝长速存在一定差异,为了筛选出适宜栽培的菌株,首先是筛选在PDA培养基和木屑培养基上都生长快的菌株。利用测定羧甲基纤维素钠培养基透明圈半径间接测定菌株纤维素酶相对活性的方法可能存在一定缺陷。野生香菇菌株和栽培菌株的菌丝生长临界温度34℃,死亡温度为36℃以上。因此,香菇菌丝耐高温较差,培养温度应控制在25℃为宜。通过菌株的菌丝长速,耐高温情况等早期鉴定方法,可以直观地对该菌株的利用前景进行评价,为杂交菌株的选择提供科学依据。
5.香菇的单核体菌株在遗传上同样存在较大的差异。本试验为杂交育种时,快速选择单核体菌株,丢弃一些遗传相同的菌株提供了科学依据,从而为繁重的杂交试验减少了工作量。
6.地理来源相同的菌株分布于不同的ISSR和酯酶同工酶聚类组中,说明四川攀西地区野生香菇遗传距离分组与菌株的不同地理来源之间无明显的相关性。德昌县野生香菇遗传多样性非常丰富,部分菌株遗传差异较大,因此在采集野生香菇种质资源时,不仅要大量收集不同地区的,而且要大量收集同一地区的野生香菇,才能获得具有特异性的优良种质资源。