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目的已有文献报道晚期糖基化终产物(advanced gly cation endproducts, AGEs)在糖尿病患者的血管病变、神经病变和创面难愈等方面均扮演重要角色。2004年,Meerwaldt等根据部分AGEs在波长370nm激发光照射后激发出440nm自体荧光(autofluorescence, AF)的特性发明了AGE reader,并对其可行性进行了初步验证。此后在全世界范围内开展的多项临床调查结果显示AF值和糖尿病患者多种慢性并发症风险有关。但是,AF值与糖尿病患者体内深部重要组织中AGEs含量间是否存在精确的量化关系呢?还有,AF值是否与临床患者足部慢性并发症间有关呢?这些问题根据目前的临床调查还没有明确的结论。本研究采用AGE reader和足部专科检查对糖尿病患者进行临床筛查和跟踪随访,研究AF值与患者足部并发症风险间的关联；同时通过高效液相色谱-质谱法对被迫截肢患者深部组织AGEs定量检测结果,与其自身AF值对照,研究两者间的量化关系。材料与方法2009年2月至2010年10月,我们在我院糖尿病中心门诊连续性收纳糖尿病人进入第一阶段调查。该阶段调查共筛查195例糖尿病患者,使用引进的AGE reader对患者进行无创法检测AF值,并参照国际糖尿病足工作组(IWGDF)制定的指南对患者进行足部并发症筛查。此后对愿意接受随访的患者进行了为期1年的跟踪随访调查。根据上述结果统计分析AF值在糖尿病患者足部并发症风险中的意义。2010年9月-2011年9月,经过充分知情同意,我们在浙江大学医学院附属第一医院血管外科和浙江大学医学院附属第二医院烧伤科(伤口治疗中心)连续收纳被迫截肢患者进入第二阶段研究。第二阶段调查共纳入33例患者,其中糖尿病足截肢患者5例,下肢动脉硬化闭塞症(ASO)截肢患者11例,既往健康的外伤截肢患者17例。我们于术前检测皮肤AF值和一般指标,于手术中采集患者的深部大动脉、神经和皮肤组织。术后运用高效液相色谱-质谱技术(HPLC-MS)对上述标本中主要AGEs指标(羧甲基赖氨酸CML、羧乙基赖氨酸CEL、戊糖苷素PEN)的含量进行精确量化检测。在第三阶段的调查中我们将上述患者的标本制作成组织切片,并使用免疫组化染色技术对上述AGEs成分在上述器官组织的分布进行定位。为了进一步调查AGEs沉积与组织损伤之间的因果机制,我们继续使用免疫组化染色技术观察了糖尿病患者上述组织中炎症指标的表达情况。结果第一阶段临床筛查结果显示糖尿病患者中AF值与患者年龄和糖尿病病程显著；存在足部溃疡者AF值显著高于无溃疡者；多因素逻辑回归结果显示AF值是与糖尿病患者足部溃疡直接、强烈相关的重要因素之一(另外两个指标分别是反映下肢血供的踝肱指数ABI和足部神经感觉的足趾震动阈VPT)。为期一年的随访调查中AF值未发生显著变化,患者的病情基本稳定,但足部风险因素仍在加强。第二阶段HPLC-MS截肢调查方面,虽然可以观察到ASO组和DM组的各组织各类AGEs含量均值都明显高于体健组,但是由于前两组的样本量稀少等原因,此项差异并不存在统计学显著性；各组织不同AGEs成分间,以及不同组织的AGEs成分间均存在显著关联；回归分析显示被测者AF值受到年龄和皮肤CML、神经组织PEN/CEL.血管组织全体AGEs水平的显著影响。第三阶段免疫组化染色定位j检测阶段,AGEs的各种成分在各组患者体内同一组织中的定位分布具有高度的一致性；无论是ASO患者还是糖尿病患者,其体内不同组织中均存在相似程度的炎症反应,并伴有不同程度的结构损伤；AGEs的各类成分在体内的分布与炎症指标的阳性沉着定位高度一致。结论糖尿病患者AF值与其足部溃疡存在直接、强烈的关联,可作为足部风险的筛查指标；即使得到严格治疗控制血糖等指标,患者足部并发症仍在进展,提示可能需要加用针对AGEs的治疗；定量检测而言,人体组织中的各种AGEs含量间存在显著相关,不同组织的AGEs含量也存在相关,因此可以通过检测浅表组织(皮肤)的一种AGEs成分(如PEN),进而推测人体组织中全部的AGEs含量；定位检测方面,AGEs的各种成分在各组患者体内同一组织中的定位分布具有高度的一致性,且与炎症指标的阳性沉着定位高度一致,因此,利用荧光特性对AGEs的某个单体(荧光性AGE,PEN)进行的检测可以反映全体AGEs成分(荧光性AGEs和非荧光性AGEs)沉积的总体情况；检测AF值不仅能评估AGEs含量,还能通过后者反映出患者体内深部组织的炎症反应和结构功能损伤。