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目的：精液游离RNA是潜在的男性生殖系统疾病研究及诊断的新分子标志物，影响精液检验的一些因素可能会影响精液游离RNA的分析结果，本实验主要研究年龄、精液中解脲脲原体（UU）阳性、阴囊热激、禁欲天数与精液标本存放温度等可能影响精液检验的临床因素，对精液中游离mRNA（cfs-mRNA）和游离microRNA（cfs-miRNA）检测水平的影响。 方法：将临床收集的精液标本依据以下因素进行分组:①年龄：分为20-25、26-30、31-35、36-40、41岁及以上五组（每组10人）；②精液中UU阳性：排除其他常见生殖系统感染，根据精液中有无UU DNA分两组（每组12人）；③阴囊热激：志愿者（每组5人）每天43℃温浴30 min，连续10天，热激前及热激开始后每两周取一次精液，监测精液参数变化，选取温浴前、精液参数最差期、精液参数恢复期三组精液标本；④禁欲天数：志愿者4人，禁欲天数1、2、7、≥13天各取精液一次；⑤精液标本存放温度：3份精液标本，液化后每份标本分为4℃、-20℃和-70℃三组，依次存放0天、1天、3天、7天、14天、28天。本实验主要研究临床因素对检测结果的影响，为使结果便于分析，选用精液参数正常标本（阴囊热激后除外）。精液标本液化后离心取精浆，提取RNA前冻存于液氮中。Trizol LS方法提取精浆游离RNA，用不同的逆转录试剂盒将cfs-mRNA与cfs-miRNA逆转录成相应的cDNA。检测cfs-mRNAs指标包括ACTB（广泛表达）、DDX4（睾丸特异性表达）、WFDC9（附睾特异性）、SEMG1(精囊腺特异性)、TGM4（前列腺特异性）；cfs-miRNAs包括miR-30d-5p（广泛表达）、miR-93-5p（广泛表达）、miR-514a-3p（睾丸特异性表达）、miR-892a（附睾特异性）、miR-141-3p（精囊腺和前列腺主要表达）、miR-221-3p（睾丸主要表达）。制备mRNA与miRNA标准品，10倍梯度稀释。进行荧光定量PCR绝对定量分析，计算cfs-mRNA和cfs-miRNA浓度，结合精液体积计算总量，统计学分析上述不同因素对这些组织特异性指标检测水平的影响。 结果：年龄、精液UU阳性对各cfs-mRNA和cfs-miRNA浓度和总量检测水平无明显影响；阴囊热激会引起cfs-mRNA中的ACTB、DDX4、WFDC9与cfs-miRNA中的miR-514a-3p与miR-221-3p浓度升高，其他cfs-mRNA和cfs-miRNA无明显变化；随着禁欲天数的延长，精液中SEMG1 cfs-mRNA的浓度与总量呈逐渐降低趋势，其他cfs-mRNA和cfs-miRNA无明显变化；存放在4℃、-20℃和-70℃的精液标本，随着放置天数的延长（≤28天），各cfs-mRNA和cfs-miRNA的浓度无明显变化。 结论：年龄、精液UU阳性对精液中cfs-mRNA与cfs-miRNA的检测水平无明显影响；阴囊热激主要影响精子发生，使睾丸来源cfs-mRNA与cfs-miRNA受到明显影响，对附睾影响次之，而对前列腺与精囊腺无明显影响，提示在将精液游离RNA用于研究及临床时，热激相关职业与环境因素应予以考虑；禁欲天数对SEMG1 cfs-mRNA有影响，对其他cfs-mRNA与cfs-miRNA无明显影响；临床检验常用存放条件（4℃、-20℃和-70℃）对cfs-mRNA与cfs-miRNA无明显影响。