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目的1.筛选大鼠缺血心肌微血管内皮细胞（Cardiac Microvascular EndothelialCells,CMECs）血管生成过程中的核心microRNA，阐明缺血CMECs血管生成的microRNA调控机制。2.观察益气活血中药对急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction,AMI）患者血浆核心microRNA的影响。方法1.实验研究（1）选取220-280g成年雄性SD大鼠，结扎法建立心肌缺血模型，植块法培养CMECs，倒置相差显微镜观察细胞形态学特征，免疫组化法鉴定特异性抗原。（2）大鼠缺血CMECs作为缺血组，正常大鼠CMECs作为正常组。观察血管新生的生物学特征，噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线并检测细胞增殖能力，划痕法测定细胞迁移能力，倒置相差显微镜观察管腔结构形成情况；确定CMECs血管新生的迁移、增殖、成管的窗口期，real-time PCR检测ERK和p53mRNA的表达情况。（3）根据两组细胞增殖、迁移、成管的窗口期，运用microRNA芯片检测缺血CMECs血管生成过程中microRNA的动态表达变化，筛选差异表达显著的microRNA并应用real-timePCR验证。根据差异表达microRNA在迁移、增殖和成管三个时期的表达模式，获得主要与迁移相关的microRNA，与增殖相关的microRNA，与成管相关的microRNA，拟定出缺血CMECs的核心microRNA。进而对核心microRNA进行靶基因预测并应用real-time PCR验证，同时，Western-blot检测靶基因的蛋白表达，及血管生成关键蛋白MAPK、PI3K、Akt、VEGF的表达。2.临床研究选择AMI患者30例，随机分为治疗组和对照组，每组各15例。治疗组给予常规西药联合益气活血中药治疗，对照组给予常规西药治疗。入院后1h、治疗2周后检测两组核心microRNA的表达情况。结果1.实验研究（1）心肌缺血模型制作成功，镜下观察部分CMECs刚游离出组织块时呈星形或多边形，当细胞生长至亚融合状态呈短梭形并呈铺路石样，部分区域可见管腔样或血管网络状结构，具备典型微血管内皮细胞特征；免疫细胞化学染色鉴定，Ⅷ因子、CD31相关抗原均为阳性，表明所培养细胞为微血管内皮细胞。（2）正常组和缺血组迁移窗口期均为第1天、成管窗口期均为第2天，而正常组和缺血组增殖窗口期分别为第3天、第6天；两组比较，缺血组迁移率、增殖率和成管率均低于正常组，以迁移率降低最为明显（P<0.01）；缺血组ERK、p53mRNA表达均高于正常组（P<0.05）。（3）根据表达量差异的显著性以及与血管生成的关系，确定了缺血CMECs迁移的关键microRNA为mir-223-3p；增殖的关键microRNA为mir-142-5p；成管的关键microRNA为mir-221-5p，并最终确定了缺血CMECs血管新生的核心microRNA是mir-223-3p。Real-time PCR验证mir-223-3p结果与芯片结果一致。生物信息学预测Rps6kb1为mir-223-3p的靶基因，Pathway分析报告Rps6kb1通过参与HIF-1信号通路调控血管生成。进一步研究显示，Rps6kb1/HIF-1信号通路下游分子VEGF、MAPK、PI3K、Akt的基因和蛋白表达在缺血CMECs的迁移期和增殖期均明显下调。2.临床研究入院后1h，治疗组、对照组mir-223-3p表达分别为（32.139±8.867）、（32.938±15.808）；治疗2周后，治疗组、对照组mir-223-3p表达分别为（2.172±0.756）、（5.630±1.120）。治疗组前后比较，mir-223-3p表达明显下降（P<0.01）；与对照组比较，治疗组mir-223-3p表达下降（P<0.05）。提示益气活血中药能够降低AMI患者血浆mir-223-3p的表达。结论1.结扎法制作大鼠心肌缺血模型成功率较高，组织植块法可获得纯度高、结构和功能良好的缺血CMECs，为缺血性心脏疾病研究奠定基础。2.缺血CMECs的血管新生能力明显降低，血管新生增殖窗口期改变，可能与ERK和p53mRNA表达的变化有关，为进一步研究其基因组学及药物干预提供实验依据。3.确定mir-223-3p是缺血CMECs血管新生的核心microRNA。4.阐明了mir-223-3p调节Rps6kb1/HIF-1信号通路，抑制缺血CMECs血管新生的迁移和增殖过程，最终降低了血管新生能力。mir-223-3p可能成为治疗缺血性心脏病血管新生的核心靶点。5.益气活血中药可能通过降低AMI患者mir-223-3p表达调节Rps6kb1/HIF-1信号通路，发挥促进缺血心肌血管生成作用。