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目的:
运用现代数理统计方法，整理中医古籍关于“噎膈”记载的相关文献，深层次探讨“噎膈”的病因病机，并总结治疗噎膈的方药，结合现代分子生物学技术，组成清热化痰活血方。观察磷酯酶介导的生长信号转导对食管癌细胞EC9706增殖的作用，以及清热化痰活血方及其拆方清热方、化痰方、活血方对食管癌EC9706细胞增殖的影响，阐明中医“噎膈”病机“痰、瘀、热毒”互结的分子生物学内涵。
方法:
通过文献挖掘整理，筛选出267味具有治疗噎膈作用的中药，运用导师多年科研经验积累的成熟组方方法:MTT法筛选出对EC9706细胞抑制效应较高的中药，并结合中医药理论初步组成清热化痰活血方，运用拟和曲线得出各组方的最佳用药量及药效时间，最终组成清热化痰活血方；结合中医理论、正交实验结果将清热化痰活血方拆方为清热方、化痰方、活血方；分别用四个治疗组作用于食管癌细胞EC9706，倒置显微镜观察四个治疗组干预后细胞的形态变化；采用Western blot法检测各组方对食管癌细胞EC9706中EGFR、PLC-γl、PKCα、MARCKS、PDGFRp、PLD蛋白表达的影响，探讨磷酯酶介导的生长信号在食管癌发病中的作用机制。
结果:
1.MTT结果显示，各筛选药物中当归、黄连、斑蝥、旋覆花、地骨皮、瓜蒂抑制率均大于50％。
2.根据267味中药筛选结果，结合中医理论，组成清热化痰活血方(由当归、黄连、斑蝥、旋覆花、地骨皮、瓜蒂组成)，并按照中医理论拆方为清热方、化痰方、活血方。
3.使用清热方、化痰方、活血方及清热化痰活血方干预食管癌细胞EC9706，结果显示EC9706细胞12小时后开始增殖，48-72小时增殖迅速，72小时后出现平台，且四个组方可不同程度的抑制EC9706细胞增值，并有存在的剂量依赖性及时效关系。以清热化痰活血方抑制率最佳，最高抑制率可达90.1％。
4.食管癌EC9706细胞EGFR、PLC-γl、PLD、PKCα、MARCKS、PDGFRβ蛋白表达明显增高，用清热化痰活血方及其拆方对细胞生长干预结果显示，合方组可显著抑制EGFR、PLC-γ1、PLD、PKCα、MARCKS、PDGFRβ的蛋白表达。
5.在食管癌EC9706细胞中，EC9706细胞的增殖率与EGFR、PLC-γ1、PKCα的表达呈正相关，且PDGFRβ与PLD、PKCα的表达呈正相关。
结论:
1.清热化痰活血方对食管癌细胞EC9706的增值有显著的抑制作用。
2.EGFR-PLCγ1-PKCα，PDGFRβ-PLD-PKCα信号通路是抑制食管癌细胞增殖的重要环节。
3.揭示了抑制磷酯酶介导的生长信号转导通路的表达，是清热化痰活血方抑制食管癌细胞EC9706生长的重要机制。
4.EGFR-PLCγ1-PKCα，PDGFRβ-PLD-PKCα信号通路的超表达可能是中医学噎嗝的病机“痰、瘀、热毒”互结的分子生物学基础之一。