【摘 要】
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目的:通过蛋白质组学的同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术探索冠心病血瘀证患者蛋白质层面的蛋白质上调或下降的
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目的:通过蛋白质组学的同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术探索冠心病血瘀证患者蛋白质层面的蛋白质上调或下降的变化,推测冠心病血瘀证的中医病因病机与其的内在关系及规律。方法:本研究共纳入病例125例,分为冠心病血瘀证组、冠心病非血瘀证组、健康人组及中药干预组;应用i TRAQ技术,通过对冠心病血瘀证组与冠心病非血瘀证组、冠心病血瘀证组与健康人组、冠心病血瘀证组与中药干预组的两两比较,对所鉴定的差异蛋白进行GO(Gene ontology)注释及KEGG Pathway通路分析,采用STRING数据库对差异蛋白进行相互作用分析。结果:血清标本鉴定到蛋白质总数780个,筛选出变化倍数在1.5倍(上下调)以上的差异蛋白。比较得到:冠心病血瘀证与健康人组两组共53个蛋白点表达相差1.5倍以上,其中26个上调,27个下调。KEGG pathway结果发现差异蛋白显著聚集在凝血与补体级联反应信号通路(ko04610,P<0.05);肌动蛋白细胞骨架调节信号通路(ko04810,P<0.05);ECM受体相互作用信号通路(ko04512,P<0.05)。PPI相互作用网络中关键的节点蛋白包括上调蛋白:C反应蛋白(CRP)、补体C1q A(C1QA)、补体C1q B(C1QB)、分泌蛋白(SPARC)、纤维连接蛋白1(FN1)、蛋白质C(PROC)、补体C1q C(C1QC)、补体成分8β链(C8B)、补体因子H(CFH)、凝血因子X(F10)、补体8α链(C8A);以及下调蛋白:骨膜蛋白thy6(POSTN)、血小板糖蛋白V(GP5)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A4(SERPINA4)、凝溶胶蛋白(GSN)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A1(SERPINA1)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3(SERPINA3)。冠心病血瘀证组与非血瘀证组两组共27个蛋白点表达相差1.5倍以上,11个蛋白上调,16个蛋白下调。在蛋白互作网络中关键的节点蛋白包括上调蛋白:纤维连接蛋白1(FN1)、蛋白S(PROS1)、分泌磷蛋白24(spp2)、补体C1q A(C1QA);以及下调蛋白:原肌球蛋白α-4(TPM4)、踝蛋白1(TLN1)、原肌球蛋白α-1(TPM1)、肌球蛋白-9(MYH9)。中药干预组与血瘀证组两组共有26个达相差1.5倍以上,其中8个上调,18个下调。KEGG pathway结果发现差异蛋白聚集在凝血与补体级联反应信号通路(ko04610,P<0.05);原发性免疫缺陷信号通路(ko05340,P<0.05)。相互作用网络中关键的节点蛋白包括上调蛋白:角蛋白1(KRT1)、凝血因子12(F12);以及下调蛋白:载脂蛋白E(APOE)、原肌球蛋白4(TPM4)、丝氨酸蛋白酶抑制剂H1(SERPINH1)、C反应蛋白(CRP)。结论:1冠心病血瘀证与免疫反应、血小板参与的凝血反应亢进有密切的联系。2血瘀证与健康人组的差异蛋白CRP、Apo E在使用中药后显著降低,CRP、Apo E可能为中药作用靶点,其与冠心病血瘀证的形成关系需进一步探究。
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