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本研究以优化牛体细胞核移植的技术环节为目的，从体细胞克隆牛的重要环节，供体细胞凋亡与胚胎发育的关系、卵母细胞成熟、受体卵母细胞的去核方法及重构胚的发育等方面分别进行了研究，具体结果如下：
1.通过对牛耳皮肤成纤维细胞分离培养及其生长曲线进行测定表明，牛耳皮成纤维细胞的生长增殖的滞留期为1—3天，对数生长期为3—7天，平台期为7—9天。
2.对不同代次牛耳皮肤成纤维细胞中BCL—2与BAX基因进行实时定量RT—PCR检测，结果显示：五个代次的牛耳皮肤成纤维细胞中均有BCL—2与BAX基因的表达，并且随代次增加BCL—2的表达量相对于BAX的表达量有升高的趋势。采用常用的4、6、8、10、12代的成纤维细胞作为克隆牛的供体细胞，随代次的增加，供体细胞的凋亡会可能会受到一定程度的抑制，供体细胞存活期有可能会延长。对核移植的效率可能会有一定程度的提高。
3.比较了不同卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法对牛克隆胚的影响，结果表明：成熟培养19h的卵母细胞中的极体与中期染色质偏移大于30°与成熟培养17h偏移比率相比（17.21％ VS7.73％）两者之间差异极显著（P<0.05）；体外成熟培养17h后采用盲去核和荧光染色辅助去核两种去核方式对重构胚的融合率、卵裂率、囊胚发育率差异均不显著（P<0.05）。综上所述，体外成熟培养17h后采用盲去核是切实可行的一种方法。
4.以两种来源不同的牛耳皮肤成纤维细胞作为供体细胞进行核移植，结果显示以成纤维细胞B（71.15％）作为供体细胞重构胚的融合率相对于成纤维细胞A（61.95％）有增高的趋势，但差异不明显；核移植后重构胚的发育的差异也不显著（P>0.05）。
5.比较了供体细胞血清饥饿与否对牛体细胞核移植的影响。研究结果显示，供体细胞的血清饥饿与否对重构胚的融合以及发育的影响均不显著（74.63％ VS58.62％）。
6.比较了5％CO2—空气与5％CO2—5％O2—90％N2两种不同气相对牛核移植重构胚发育的影响。研究结果表明，两种气相对重构胚后期发育的影响差异不显著（P>0.05），但5％CO2—5％O2—90％N2对牛核移植重构胚的后期发育有一定的促进作用。