论文部分内容阅读
为了分离筛选出适合葡萄酒酿造的优良酒类酒球菌（Oenococcus oeni,O. oeni）菌株,用ATB分离培养基从我国新疆、河北、甘肃葡萄酒产区酒精发酵结束的干红葡萄酒中进行酒类酒球菌的分离鉴定,从中筛选出适合中国葡萄酒酿造的优良菌株。主要研究结果如下:1.采用ATB分离培养基从新疆、河北、甘肃葡萄酒产区酒精发酵结束的干红葡萄酒中共分离得到49株苹果酸-乳酸细菌,通过对其进行培养特征、形态学特征、苹果酸分解实验、革兰氏染色实验、过氧化氢酶实验、生理生化实验鉴定,结果表明:分离菌株均为酒类酒球菌。2.通过对分离纯化的49株菌株进行单因子（pH、酒精、SO2）耐受性实验,选出单因子抗性较好的14株菌进行复合因子（pH×酒精×SO2）耐受性实验,结果表明:XJ-2a比对照菌株SD-2a有较强的适应性。XJ-2b、HB-1A、XJ-3a、HB-1B也与对照菌株SD-2a的生长量无明显差别,具有较强的酿酒适应性。3.用种属特异性PCR（species-specific PCR）对分离菌株进行分子生物学鉴定。结果表明:14株单因子抗性较好菌株均能扩增出大小为1025bp的唯一清晰条带,说明这14株菌均为酒类酒球菌。4.用16S rRNA序列同源性分析对分离菌株进行分子生物学验证。结果表明:14株单因子抗性较好菌株的测序结果与数据库中酒类酒球菌的同源性均达到了99%以上,进一步证明了这14株菌均为酒类酒球菌,并构建了相应的系统进化树。除此之外,通过对14株实验菌株与链球菌科中7个属中模式菌株的16S rRNA基因序列建立相似性矩阵,结果表明:14株实验菌株的基因序列与O. oeni的相似性达到100%,Leuconostoc mesenteroides与O. oeni亲源关系相对较近,相似性达到了83.5%。5.优良菌株O.oeni-XJ-2a生长曲线的测定。结果表明:O.oeni-XJ-2a比对照菌株O.oeni-SD-2a最大菌悬液的光密度值(OD600)大0.267,有较好的生长特性。本文通过形态学特征、生理生化鉴定、种属特异性PCR以及16S rRNA序列同源性分析,可将这14株菌鉴定为酒类酒球菌（O. oeni）。