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目的:观察地塞米松对SD大鼠原代成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对SD大鼠原代成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法:体外分离培养SD大鼠的原代成骨细胞,观察大鼠成骨细胞形态,采用茜素红染色法和碱性磷酸酶(ALP)染色法鉴定成骨细胞。取对数增长期的成骨细胞,根据地塞米松浓度分别为:0 mol/L(空白对照组)、10-8mol/L、10-6 mol/L、10-4mol/L干预成骨细胞24小时。干预结束后,采用DAPI染色观察细胞核形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,JC-1荧光探针检测线粒体跨膜电位,Western Blot检测成骨细胞中促凋亡蛋白Bax的表达。采用单因素方差分析,方差齐组间两两比较采用LSD-t检验。结果:1.采用 0 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L、10-4mol/L地塞米松干预成骨细胞24小时后,DAPI染色发现,10-8mol/L地塞米松组的成骨细胞很少发生凋亡,10-6mol/L和10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡明显,地塞米松的浓度越高,核固缩、核裂解等凋亡现象越明显。提示随着地塞米松的浓度增高,成骨细胞凋亡现象也随之增加。2.采用不同浓度的地塞米松干预大鼠成骨细胞24小时后,通过检测凋亡率发现,与空白对照组相比,10-8 mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率无明显变化,10-6 mol/L、10-4 mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与10-8mol/L地塞米松组相比,10-6mol/L和10-4 mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与10-6mol/L地塞米松组相比,10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。提示地塞米松可诱导成骨细胞凋亡,呈剂量依赖性。3.采用不同浓度的地塞米松干预大鼠的成骨细胞24小时后,透射电镜观察发现,空白对照组成骨细胞中细胞核形状规整、胞质内线粒体结构完整;10-8mol/L地塞米松组成骨细胞的细胞核形状较规整、线粒体结构较完整;10-6mol/L地塞米松组成骨细胞的细胞核出现核固缩,胞质内线粒体数目较空白对照组的明显减少;10-4mol/L地塞米松组成骨细胞的细胞胞核固缩明显、线粒体大小不一,出现大量空泡样改变,线粒体嵴断裂。提示地塞米松可引起大鼠成骨细胞核固缩、线粒体减少,导致了凋亡的发生,随着地塞米松浓度增加,地塞米松导致成骨细胞凋亡的作用越明显。4.采用不同浓度地塞米松干预大鼠成骨细胞24小时后,检测线粒体膜电位下降的细胞比例(F值)发现:与空白对照组相比较,10-8 mol/L地塞米松组线粒体膜电位下降的细胞比例无明显变化(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组发生线粒体膜电位下降的细胞比例显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);与10-8mol/L地塞米松组相比,10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组发生线粒体膜电位下降的细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与10-6mol/L地塞米松组相比,10-4mol/L地塞米松组发生线粒体膜电位下降的细胞比例增加,差异有统计学意义(P<0.05)。提示地塞米松可诱导大鼠成骨细胞线粒体膜电位下降的细胞比例增加,呈剂量依赖性。5.采用不同浓度地塞米松干预大鼠成骨细胞24小时后,检测促凋亡蛋白Bax的表达发现,与空白对照组比较,10-8mol/L地塞米松组成骨细胞Bax表达增加不明显(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组成骨细胞的Bax表达显著增加(P<0.05),与10-8mol/L地塞米松组相比,10-6 mol/L、10-4mol/L地塞米松组成骨细胞的Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与10-6mol/L地塞米松组相比,10-4mol/L地塞米松组成骨细胞的Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。提示地塞米松可能通过增加Bax蛋白表达诱导成骨细胞凋亡,且呈剂量依赖性。结论:10-6mol/L和10-4mol/L地塞米松可能通过线粒体途径诱导大鼠成骨细胞凋亡。