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目的:帕金森病(PD)是常见的中枢神经系统变性疾病之一,其病因和发病机制不明。目前研究证实炎症在PD病因和发病机制中起重要作用。而小胶质细胞激活介导的炎症反应对DA能神经元损伤具有启动作用,激活后的小胶质细胞可释放大量的致炎因子、超氧化物、自由基等,致神经营养因子下调、线粒体功能紊乱,并产生氧化应激、兴奋性毒素作用等为主的级联反应,这一病理过程促进了PD缓慢进展。因此抑制炎症反应,联合神经保护治疗来延缓甚至阻止PD进展已成为该领域新的研究热点。选择性COX-2抑制剂-塞来昔布可阻断COX-2介导的酶促反应,抑制胶质细胞激活为主的一系列炎症反应发生,从而对DA能神经元起神经保护作用。睫状神经营养因子(CNTF)可促进前体神经元生长、分化、成熟,维持各种神经元的存活,促进受损伤神经元再生修复,阻止神经元退行性变,并可作用于星形胶质细胞分泌多种神经营养因子来弥补神经神经因子分泌不足。本研究利用细胞培养模型,选择炎症反应的诱导剂LPS、选择性COX-2抑制剂塞来昔布和睫状神经营养因子与DA能神经元共同培养,目的是观察炎症反应对DA能神经元的损伤作用,及抗炎药物和神经营养因子对DA能神经元的保护作用。为最终根治PD奠定实验基础。迄今为止,相关研究国内外鲜有报道。方法:取新生24小时内SD大鼠,无菌条件下取出腹侧中脑,经消化、离心、重悬和过滤后制成单细胞悬液,以2×106 /ml细胞密度接种于含bFGF20ng/ml、2%b27的DMEM/F12培养液中,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2孵箱中培养。接种后第3d首次半量换液,以后每2-3d全量换液一次。于体外培养第7天,细胞铺满瓶底,突触相互融合后开始用LPS诱导炎症反应制成PD体外模型。对照组不加LPS诱导剂及其它干预因素。实验组在加入LPS20ng/ml,混和均匀使其充分接触后,依据加入的干预因素不同分为4组,(1)LPS组;(2)CNTF组;(3)CB组;(4)CNTF+CB组。整个细胞培养过程于倒置显微镜下密切观察细胞形态变化,并在诱导第12h、24h时分别检测培养液上清中TNF-α浓度(ELISA法);于第12h、24h时进行免疫细胞化学法检测,分别计数TH阳性细胞数。结果:24小时内新生鼠中脑来源的神经细胞体外培养易于成活,且在神经营养因子作用下能维持较长一段时间。培养24h后可见大部分细胞贴壁,48h可见部分细胞伸出1-2个短的突起,细胞呈单层分布。72h时大部分细胞均伸出突起,培养7天后细胞体明显增大,可见细胞出现较长的树突和轴突,形成双极和多极形态。ELISA法检测培养液上清中TNF-α浓度发现,对照组中TNF-α含量较低,实验组中TNF-α含量较高,相同时间点各实验组与对照组比较差异显著(P<0.01)。相同时间点各实验组比较发现,CB+CNTF组TNF-α含量最低(12h为218.49±15.78,24h为310.91±25.69,pg/ml),其次依次为CB组、CNTF组、LPS组,相同时间点组间比较差异非常显著(P<0.01)。免疫组化检测发现,对照组、实验组中TH阳性细胞数各不相同,同时间点对照组与各实验组比较差异非常显著(P<0.01),各实验组间同时间点相比,CB+CNTF组TH阳性细胞数较多(12h为50.65±1.76,24h为46.67±1.62),依次为CB组、CNTF组、LPS组,同时间点组间比较差异非常显著(P<0.01),且同一实验组不同时间点比较发现,CB+CNTF组、CB组随时间延长TH阳性细胞数明显减少,差异显著(P<0.05),LPS组和CNTF组TH阳性细胞数减少更明显,差异非常显著(P<0.01)。结论:采用24h内新生大鼠中脑来源神经细胞成功进行了体外原代培养。选择炎症反应的诱导剂-LPS制作了体外PD炎症模型。证实了非甾体类抗炎药物-塞来昔布、神经营养因子-CNTF均可减轻LPS对体外培养DA能神经元的炎性损伤作用,且塞来昔布优于CNTF。塞来昔布与CNTF二者联合具有更强的抗炎及神经保护作用。