论文部分内容阅读
目的：以来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)动物模型为研究对象,探讨胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)与PCOS大鼠卵巢病理结构改变之间的关系,并探讨二甲双胍对PCOS大鼠的治疗作用并分析其可能的作用机制。方法：1.PCOS大鼠动物模型的建立6周龄清洁级雌性Wistar大鼠40只,有4天的规律动情周期,适应性喂养3天后随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。模型组每天给予来曲唑1mg/kg溶于1%羧甲基纤维素(Carboxmethlycellulose,CMC)中,连续灌服21天；对照组正常饲养,此期需每日监测大鼠动情周期有无变化。造模完成后模型组随机抽取10只,通过阴道涂片结果、血清激素水平和卵巢组织学多囊变来评价造模效果,成功率>80%时,将模型组剩余大鼠随机分成二甲双胍治疗组(MF组)和PCOS组各10只。MF组每天给予二甲双胍270mg／kg,用无菌蒸馏水溶解灌胃,PCOS组和对照组每天给予3ml无菌蒸馏水灌胃,连续14天。2.卵巢组织学检查各组大鼠卵巢组织行石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察其病理结构。3.血清生殖激素及胰岛素水平测定采用放射免疫法(Radio-immunity approach,RIA)测定各组大鼠血清黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)、睾酮(Testoterone,T)、胰岛素(Insulin,INS)值。4.卵巢中IGF-Ⅰ、TGF-β1的表达采用免疫组织化学方法检测各组大鼠卵巢生长因子IGF-I、TGF-β1的表达,并进行图象分析。结果：1.动情周期的变化：模型组在应用来曲唑12天后动情周期失去规律性变化,提示无排卵。2.卵巢解剖学检查PCOS组卵巢重量显著高于对照组及MF组。解剖学观察卵巢表面较苍白,体积增大,可见较多囊状扩张的卵泡。3.卵巢组织学检查PCOS组镜下见卵泡囊性扩张,少量卵巢内有黄体组织,颗粒细胞层数减少,仅为2-3层,颗粒细胞排列疏松,卵泡膜细胞层明显增厚。MF组镜下见颗粒细胞层数增加,卵泡膜细胞层变薄,黄体组织数量较PCOS组明显增多。4.血清生殖激素及胰岛素水平PCOS组血清T、LH、INS浓度高于对照组(P<0.05),血清E2、FSH、P浓度低于对照组(P<0.05)；MF组血清T、LH, INS浓度低于PCOS组(P<0.05),血清E2、FSH. P浓度高于PCOS组(P<0.05)。5. IGF-I在卵巢中的表达IGF-I主要在卵巢组织的颗粒细胞、卵泡膜细胞表达,而间质细胞不表达。PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞IGF-I表达水平明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),MF组颗粒细胞IGF-I的表达相比PCOS组明显下降(P<0.05)。6.TGF-β1在卵巢中的表达TGF-β1强表达于原始和窦前卵泡卵母细胞胞浆,而在颗粒细胞、卵泡膜细胞及间质细胞表达较弱。TGF-β,在PCOS组卵泡卵母细胞、颗粒细胞的表达强度与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；而在卵泡膜细胞和间质细胞中的表达,PCOS组显著高于对照组(P<0.05),MF组卵泡膜细胞和间质细胞TGF-β1的表达相比PCOS组明显下降(P<0.05)。结论：1.应用来曲唑(非甾体类芳香化酶抑制剂)所制备的PCOS大鼠模型,是一种理想的PCOS模型,可靠性强。2. IGF-Ⅰ、TGF-β1在卵巢组织中的表达与PCOS的发病密切相关。3.二甲双胍可通过调节血清激素水平和IGF-Ⅰ、TGF-p1的表达而对PCOS起到治疗作用。