【摘 要】
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目的：探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)对大鼠体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的保护作用及机制方法1、采用
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目的：探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)对大鼠体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的保护作用及机制方法1、采用密度梯度离心法、贴壁分离法原代分离、培养、纯化绿色荧光蛋白转基因(enhanced green fluorescent protein transgenic, eGFP)大鼠骨髓MSC。2、成年雄性SD大鼠72只,体重(288.8±26.1)g,随机分为：sham组、CPB组和CPB+MSC组。sham组穿刺但不实施体外循环；其余两组建立CPB模型,CPB+MSC组于转流结束后经右侧颈外静脉注射1.5*106 MSCs。于术后6h、24h、48h取血清及肾标本。检测血清Cr、IL-10、IL-6及肾组织VEGF、IGF-1的含量,并切片观察肾组织损伤及MSC的归巢。结果1、成功分离、提取MSC,培养至第3代时形成漩涡状、纺锤形、形态相对均一的贴壁细胞,荧光显微镜下可观察大片具有绿色荧光表达的MSC,流式细胞检测CD29、CD90、CD45、CD34的表达率分别为99.74%、98.01%、0.16%、14.09%。2、建立大鼠CPB-AKI模型(成功率>90%)。①比较各组血清Cr、IL-6水平发现,M组、C组较S组显著升高(P<0.05),且M组在各时间点对应水平低于C组(P<0.05)。而各组血清IL-10比较发现,M组较C组显著升高(P<0.05),同时M组在各时间点对应水平高于C组(P<0.05)。②比较肾组织VEGF、IGF-1的表达发现,M组水平较C组增高。③观察各组肾脏病理切片显示,M组较C组损伤减轻。冰冻切片观察eGFP-MSC大量积聚于肺组织中最多,肾脏几乎未观察到归巢。结论1、右侧颈外静脉及双侧股动脉插管,能够成功在体重224-320g雄性SD大鼠上建立CPB-AKI模型(成功率>90%)2、MSC能够对CPB-AKI的产生保护作用,可能是通过旁分泌具有抗炎及细胞保护作用的活性因子,完成对机体免疫系统的调节及损伤组织的修复。
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