【摘 要】
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鲈鲤(Percocypris pingi)是长江上游特有的凶猛肉食性鱼类。为了揭示这一新兴养殖对象消化系统早期的形态结构与功能关系,本文采用组织学方法观察了1-90 dah(days after hatching,dah)鲈鲤的消化系统早期形态发育过程,并运用双抗体夹心法和实时荧光定量PCR方法分别研究了主要消化酶活性和基因表达规律。主要研究结果如下:1、在实验室饲养条件下(水温20.6±0.7℃
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鲈鲤(Percocypris pingi)是长江上游特有的凶猛肉食性鱼类。为了揭示这一新兴养殖对象消化系统早期的形态结构与功能关系,本文采用组织学方法观察了1-90 dah(days after hatching,dah)鲈鲤的消化系统早期形态发育过程,并运用双抗体夹心法和实时荧光定量PCR方法分别研究了主要消化酶活性和基因表达规律。主要研究结果如下:1、在实验室饲养条件下(水温20.6±0.7℃),观察了鲈鲤肠道形态变化过程。结果显示,孵出期(1 dah)时仔鱼肠道未分化,鰾雏形期(5 dah,全长:12.50±0.36mm)时肠道贯通,其两个折点分别出现在背鳍形成期(30 dah,全长:21.96±1.21mm)和臀鳍形成期(33 dah,全长:23.56±1.33mm),此后肠道呈―Z‖形,形态无明显变化。在肠道的发育过程中,仔稚鱼肠长度/全长的比值呈先下降后上升的变化趋势。开口之前肠长度/全长的比值较高(0.50±0.04),之后逐渐降低,直到25 dah时达到最低(0.39±0.03),背鳍形成期(30 dah,0.41±0.03)之后比值逐渐上升至0.50±0.03(43dah),稚鱼期(46-90dah)比值差异不显著,平均达到0.53±0.15。基于各肠段长度与全长比值和各肠段之间的比值分析得出,前肠、后肠和全长的生长速率几乎一致,而中肠的生长速率快于全长、前肠和后肠。2、通过常规石蜡组织切片和HE染色技术,观察了鲈鲤消化系统早期发育组织学变化过程。初孵仔鱼消化系统未分化位于卵黄囊的背面。在鳃丝出现初期(3 dah,全长:11.66±0.43mm),口咽腔开始分化并且杯状细胞和味蕾开始出现,与此同时,食道、肠道、肝脏和胰脏也开始分化。食道中的杯状细胞及第一褶皱的出现都在鰾雏形期(5 dah,全长:12.50±0.36mm),同时肠道中的褶皱及纹状缘也开始出现。鰾一室期(7 dah,全长:13.23±0.43mm)时仔鱼开口摄食,肠道中可见杯状细胞。口咽腔及食道都在鰾二室期(20 dah,全长:16.87±1.07mm)时发育基本完成。背鳍形成期(25 dah,全长:19.96±1.08mm)时肠道发育基本完成。此外,腹鳍形成期(37 dah,全长:25.45±1.26mm)时肝脏和胰脏组织结构发育基本完成。3、采用双抗体夹心法分析了鲈鲤早期发育阶段胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的比活力。结果发现,初孵仔鱼(1 dah,全长:9.94±0.54mm)就可检测到胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的比活力,表明仔稚鱼在1 dah时具有初始消化能力。胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、α-淀粉酶和脂肪酶比活力呈先上升后下降的变化趋势,α-淀粉酶和脂肪酶比活力在肠道出现第二个折点(33 dah,全长:23.56±1.33mm)时出现峰值,而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶比活力在肝脏和胰腺组织结构发育基本完成(37 dah,全长:25.45±1.26mm)时出现峰值。4、采用实时荧光定量PCR方法对1-90 dah鲈鲤try、chy和amy的表达进行分析。结果表明,鲈鲤胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶基因表达量呈先上升后下降的变化趋势,且在鰾二室期(15 dah,全长:14.94±0.52mm)时达到最大值。α-淀粉酶基因的表达量在开口之前(1-5 dah)稳定在一个较高的水平(0.82±0.01),之后α-淀粉酶基因表达量逐渐下降到实验结束(90dah,0.73±0.02)。综上所述,在实验室饲养条件下(水温20.6±0.7℃),鲈鲤处于臀鳍形成期(33 dah,全长:23.59±1.33mm)时肠道形态发育完成;鰾二室期(20 dah,全长:16.87±1.07mm)时,口咽腔和食道分化基本完成;背鳍形成期(25 dah,全长:19.96±1.08mm)时肠道发育基本完成;腹鳍形成期(37 dah,全长:25.45±1.26mm)时肝脏和胰脏组织结构发育基本完成;胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶比活力在臀鳍形成期时达到峰值,α-淀粉酶和脂肪酶比活力在腹鳍形成期时达到峰值;胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶基因表达量在臀鳍形成期-腹鳍形成期都保持较高水平(1.43±0.02;1.26±0.02)。所以,生产实践当中建议在此期间可对仔鱼进行饵料的转换。
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