【摘 要】
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目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T-B)联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS-PAGE检查目的重组
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目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T-B)联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS-PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况。Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株中GroEL分布。Triton X-114法提取上述菌株外膜蛋白样本,采用Western Blot法检测外膜蛋白样本中的GroEL。采用专业生物信息学软件预测GroEL的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统。采用Western Blot法和ELISA分别检测含T-B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T-B联合表位肽的免疫反应性。结果幽门螺杆菌NCTC11637和SSl株groEL基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97.68-99.63%。所构建原核表达系统能有效表达可溶性rGroEL。GroEL定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜。GroEL168、GroEL258、GroEL288. GroEL365.GroEL396和GroEL438六个主要的预测T-B联合抗原表位中,GroEL168显示了很强的阳性杂交信号。ELISA结果显示, GroEL168免疫反应性最强(P<0.01),其次为GroEL258和GroEL288(P<0.05)。结论GroEL是幽门螺杆菌外膜蛋白。GroEL168是GroEL的优势T-B联合抗原表位,可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗。
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