【摘 要】
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应用免疫荧光和免疫共沉淀技术检测鸭瘟病毒(duck plague virus，DPV) UL16蛋白(pUL16)与UL21蛋白(pUL21)的共定位及相互作用，包括pUL21在DPV复制过程中以及pDsRed-express-C1/U
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应用免疫荧光和免疫共沉淀技术检测鸭瘟病毒(duck plague virus，DPV) UL16蛋白(pUL16)与UL21蛋白(pUL21)的共定位及相互作用，包括pUL21在DPV复制过程中以及pDsRed-express-C1/UL21转染鸭胚成纤维细胞(DEF)后的细胞定位分析;pUL16与pUL21在DPV复制过程中及pEGFP-N1/UL16与pDsRed-express-C1/UL21共转染DEFs后的细胞共定位研究;采用pBIFC-VC155/UL21与pBiFC-VN173/UL16共转染及免疫共沉淀方法对pUL16与pUL21的相互作用进行检测，取得的主要成果如下: 1.pUL21细胞定位分析 利用间接免疫荧光法检测DPV pUL21在病毒复制过程中的细胞动态定位，结果显示在DPV感染细胞后的12～24h，观察到少量荧光分布在胞质中;感染后36～48h，荧光数量在细胞质及细胞核中均有明显增加;感染后60～72h，荧光数量达到最多，细胞核和细胞质内均有分布，但主要分布于细胞质内，且呈弥散的点状。同时通过构建真核重组质粒pDsRed-express-C1/UL21并转染到DEFs以检测pUL21单独的细胞分布，结果显示与病毒复制过程中的定位结果相似，主要定位于细胞质中。 2.pUL16与pUL21细胞共定位分析 通过间接免疫荧光及真核瞬间共转染两种方法，研究pUL16与pUL21在细胞中的共定位，结果发现两者的荧光区域存在重合，说明两者是存在共定位区域的，在空间上为两者发生相互作用提供了可能性。但是两种方法的结果存在差异，间接免疫荧光法所得出的结果为两个蛋白存在共定位且核质中均有分布，而通过真核瞬间共转染pEGFP-N1/UL16与pDsRed-express-C1/UL21质粒所得出的结果却显示，两种荧光完全重合且只分布在细胞质中。 3.pUL16与pUL21相互作用的研究 通过免疫共沉淀试验进行进一步验证时，发现用pUL16的抗体沉淀后的复合物中，通过蛋白免疫印迹试验，用pUL21的一抗及相应的二抗能检测到pUL21，反之亦然，表明pUL16与pUL21是存在相互作用的。
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